中枢神经系统创新药物筛选和评价课件.ppt

中枢神经系统创新药物筛选和评价 俞 丽 霞 教 授 目 前 进 展 情 况 在生命科学进入“后基因组时代”后，创新性药物研制在新的基础上有快速发展，特别表现在可以从大量未知化合物大规模进行药理效应的评价，从而快速找到有开发前景的候选药物。 中枢神经系统创新药物研究在新的时代应当有较快的发展 背 景 一、现有药物筛选和评价技术 筛选——为体外初步评价化合物药效的方法 评价——为动物模型进一步确定药效的方法 1、现有筛选技术 1）DNA为基础的筛选系统：——以cDNA、寡聚苷酸探针等高密度点样于玻片、膜等材料上，与待测样品反应，观察药物作用后对目标基因表达的影响（基因芯片技术） 2）蛋白为基础的筛选系统：——以单克隆抗体等探针高密度点样于玻片、膜等材料上，与待测样品反应，观察药物作用后对目标蛋白表达的影响（蛋白芯片技术） 3）细胞为基础的筛选系统：——以目标基因和/或报告基因转染的细胞株，高密度接种于96、384、1536孔细胞培养板，观察药物对细胞反应的作用。也有用本酵母菌作为真核细胞用于药物筛选 4）除了药效筛选系统外，用于药物研究的新技术还有评价药物在生物体内的转运、代谢过程，或评价药物的特定毒性；或评价影响药物作用的微环境 对现有筛选技术的评价 上述技术系统中，DNA和蛋白芯片针对分子变化，但不能准确反映哪种分子的增加或减少对疾病起主导作用，哪些是伴随现象；且实际需要的费用较昂贵，结果解析常常有困难，因此，对药物筛选的价值受到限制。相比之下，细胞水平筛选技术具有较大的优点。细胞是生命体的基本单位，可以反映生命活动中多种信号转导特征。 现在，已经能够对细胞各种功能分子及信号转导进行高效率检测。 总RNA抽提及纯化 RNA质量判定标准： A.RNA样本的OD260/OD280应在1.7-2.2之间。 B.总RNA电泳图谱有清晰的28S、18S条带。 C.70 ℃水浴保温1小时后的电泳图谱与水浴温前的图谱无明显差异。 2、现有评价技术 1）转基因动物模型：采用基因增强、基因敲除、基因抑制等基因打靶方法，培育出一批基因型改变的动物，对了解单个基因在生命活动中的作用起了重要作用；同时也为药物评价提供了有力的方法基础 缺点： [1]各种疾病过程是多基因功能的共同作用的结果，单一基因改变不能准确反映疾病特征； [2]由于生命体有复杂而完善的功能协调系统，单一基因改变往往由于代偿作用而得不到表现 [3]单一基因改变可激活继发性功能改变，药物作用可能不是原发性作用。 2、现有评价技术 2）整体动物客观、定量、高效评价方法： 近年来，出现利用光学信号、影像学、行为学方法对批量动物进行客观、定量、动态药效学观察，使得整体动物药效评价可以达到高效率要求。因此，提出了整体水平高效率筛选药物的观点。 3、生物信息学在药物研究中的应用 生物信息学——就是收集研究资料，建立国际水平的数据库，全世界研究者均可以利用这些数据来指导自身的研究。 目前基因、基因组及蛋白的数据库比较完善，研究者可以有效地利用这些资源来作为研究的参照。 药理学研究也需有这样的数据库来支持。 4、存在问题和发展方向 1）药物靶分子的实用化，包括在分子、细胞和整体水平的应用 2）海量数据的有效收集及转化成有价值的信息 3）药物ADME和毒性的早期研究，回忆进入临床研究的速度。 4）整体水平研究的质量和效率，特别在客观、定量、简便、快捷和计算机技术的采用 5）各种水平药效评价指标与临床疾病的符合程度 二、改进和创新中枢神经系统药物筛选和评价技术 中枢神经系统药物研究除了与其他系统有相同的特点之外，还有其特殊性。在药效评价方面往往需要观察行为活动变化，细胞及分子变化往往不能准确反映临床效应，更需要在研究方法上有所探索和创新。 目前对脑缺血有保护性的药物沿缺少，因此有非常重要的社会意义与研究前景，下面以脑缺血药物研究为例对创新药物的筛选和评价作一叙述。 总的思路：在神经元保护和神经功能再建两个方面在体外初步评价化合物，在脑缺血疾病模型确定药效，建立分子-细胞-脑片-动物模型的药物筛选和评价的标准，形成一套规范化的研究工作程序，对确认有效的药物，将进行作用机制研究及新靶点的探索。 1、以脑缺血功能变化作为筛选、评价的导向 1）分子—细胞药物筛选模型：采用分子靶向和功能导向两种策略。 分子靶向拟建立NMDA受体、半胱氨酸白三烯受体等损伤相关分子转染细胞株； 功能导向以抗急性损伤作用和促进神经再生两个方面评价药物效应。 2）离体脑片模型：脑组织切成薄片在人工条件下孵育，进行各种人工干预，是离体水平研究脑功能及药物作用的重要方法。 离体脑片介于整体与细胞水平实验之间，既保持了脑片内神经元与其他神经元、胶质细胞等的相互关系，又能在严格控制的条件下进行实验观