蒿鳖养阴软坚方对大鼠酒精性肝损伤的预防作用.docVIP

　　蒿鳖养阴软坚方对大鼠酒精性肝损伤的预防作用 作者：赵敏，郭娟，方步武，崔志清 【摘要】 目的探讨蒿鳖养阴软坚方减轻酒精性肝损伤的作用。方法采用酒精灌胃及高脂饲料、吡唑和羰基铁等建立大鼠酒精性肝病模型，灌胃蒿鳖养阴软坚方预防性治疗。造模10周后检测大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST) 、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLOB)、丙二醛(MDA)、肝组织胶原蛋白含量和基质金属蛋白酶-2,-9(matrix metalloproteinases 2,9;MMP-2,MMP-9)，光镜观察肝组织病理变化。结果与模型对照组比较，蒿鳖养阴软坚方高、低剂量组死亡率、ALT、AST、GLOB、MDA、胶原蛋白、MMP-2及MMP-9的水平显著降低(Plt;0.05)，白蛋白含量显著升高(Plt;0.05)。同时模型对照组大鼠肝组织出现点、灶状坏死、大量脂滴、炎细胞浸润，蒿鳖养阴软坚方组见少数肝细胞肿胀、脂滴少、炎症细胞浸润轻。结论蒿鳖养阴软坚方能减轻酒精性肝损伤，其部分作用机制包括抗脂质过氧化损伤、降低MMP-2和MMP-9的水平/活性。 【关键词】 蒿鳖养阴软坚方; 酒精性肝病; 基质金属蛋白酶-2,-9; 脂质过氧化物; 胶原蛋白 　酒精性肝病(alcoholic liver disease，ALD)已成为一种世界性的疾病，表现为肝脏发生不同程度的脂肪变性、炎症和坏死，继而形成肝纤维化和肝硬化甚至肝癌。目前，对ALD尚无特效治疗方法，以戒酒和营养支持为主;治疗药物主要有水飞蓟素、复方甘草酸苷、糖皮质激素、维生素类、还原型谷胱甘肽、多烯磷脂酰胆碱、腺苷蛋氨酸、硫普罗宁等, 其确切疗效报道不一[1]，某些药物甚至可损害肝脏。近年来，中医中药辨证治疗本病在改善临床症状、提高临床疗效等方面已显示出一定优势。随着酒精性肝病的进展，其治疗越来越困难，故防治酒精性肝病已成为研究的热点。本研究探讨蒿鳖养阴软坚方对大鼠酒精性肝损伤的预防作用并初步分析其作用机理，为其防治酒精性肝病提供实验依据。 　　1 材料 　　1.1 动物SPF级 Wistar大鼠100只，雄性，体质量200～240 g，购自军事医学科学院实验动物中心。 　　1.2 药物蒿鳖养阴软坚方经药学及药理研究确立生产工艺后按中试规模制备为原料药粉，以复方药物成分青蒿素(HPLC-ELSD测定)、丹酚酸B和虎杖苷(HPLC测定)作为质控指标，实验前溶于双蒸水配成一定浓度的溶液。秋水仙碱为Sigma公司产品。 　　1.3 造模原料吡唑为Fluca公司产品，羰基铁粉(YTF-0，基础粉)由岳龙超细金属材料有限公司提供，衡水老白干(酒精体积分数为65%)由衡水安平人和酒业生产。大鼠基础饲料(面料)由中国医学科学院实验动物研究所繁育场提供，金龙鱼玉米油为嘉里粮油(天津)有限公司产品，猪油购自市场。自制高脂饲料含大鼠基础饲料80%、猪油4%、玉米油16%和羰基铁0.125%，均为质量分数。 　　1.4 试剂丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)、白蛋白(ALB)和总蛋白(TP)试剂盒由南京建成生物工程研究所提供。SDS凝胶配制试剂盒由江苏碧云天生物技术研究所提供。 　　2 方法 　　2.1 造模造模大鼠8:00灌胃白酒，1次/d，酒精浓度逐渐增加，依次为10%，20%，30%，40%，50%，60%，每个浓度灌胃2 d，最后增至65%并维持该浓度再灌胃8周，该维持剂量相当于6.2 g·kg-1·d-1，体积均为1.2 ml·(100g)-1·d-1，并用吡唑25 mg·kg-1·d-1 溶于酒内灌胃。期间，造模大鼠饮用10%酒，食用高脂饲料。正常对照大鼠每日同时灌胃蒸馏水，以自来水和大鼠标准饲料喂养。 　　2.2 分组用药实验分2批进行，每批随机取4只大鼠为正常对照组(正常组，共8只)，其余均用于造模。当灌酒浓度增加到65%时，对造模大鼠按体重随机区组法分组为模型对照组(模型组，32只)、蒿鳖养阴软坚方高、低剂量组(各20只)、阳性对照药秋水仙碱组(20只)。同时进行预防性用药，每天一次于傍晚灌胃治疗药物，分别以蒿鳖养阴软坚方和秋水仙碱的临床等效剂量，按公式dB = dA ×(RB /RA ) ×(WA/WB)13 计算出大鼠用药剂量，由此算得的蒿鳖养阴软坚方用量作为低剂量(2.59 g·kg-1·d-1)，以该剂量的1012 倍作为高剂量(8.2 g·kg-1·d-1);秋水仙碱组剂量为0.09 mg·kg-1·d-1。模型组傍晚灌胃蒸馏水。 　　2.3 标本留取与指标观测大鼠一般情况;10 周后结束实验，乙醚麻醉大鼠，腹腔静脉取血，留取肝脏组织。肝组织脱脂脱水用于测定羟脯氨酸含量[2]，再换算为胶原蛋白含量。MMP-2、MMP-9检测用明胶酶谱法[3]