基因工程菌安全性,清洁生产,成本控制 已看..ppt

基因工程菌的安全性问题 多数国家都制定了有关DNA重组实验的准则，即在试管内用酶等构建异种DNA的重组分子，并用它转入活细胞中的实验，以及使用重组体的实验应遵循的规程。其目的是保证实验的安全和推动重组DNA的研究。这些准则参照了防止病原微生物污染的措施，以及根据对实验安全度的评定，采用物理密封(P1~P4)和生物学密封(B1和B2)两种方法。 物理密封是将重组菌封闭于设备内，以防止传染给实验人员和向外界扩散。物理密封由密封设施、实验室设计和实验注意事项组成。密封程度分为P1、P2、P3和P4级，数字越大，密封水平越高。 生物学密封要求用只有在特殊培养条件下才能生存的宿主，同时用不能转移至其它活细胞的载体，通过这样组合的宿主载体系统，可以防止重组菌向外扩散。 企业中进行重组菌培养时的设备标准有LS-1和LS-2。LS-2相当严格，工业生产起码应在LS-1的设备标准下培养。LS-1标准要点是：(1)使用防止重组菌体外漏，能在密闭状态下进行内部灭菌的培养装置； (2)培养装置的排气由除菌器排出； (3)使用易产气溶胶的设备时，要安装可收集气溶胶的安全箱等。设计用于基因重组菌的培养装置时，不仅要考虑外部杂菌的侵入，还要防止重组菌的外漏。此外，培养后的菌体分离、破碎等处理也必须在安全柜内进行，或是采用密闭型的设备。 在普通通气搅拌罐中可能发生外漏的部位和操作。归纳起来有： 排气， 机械密封， 接种， 取样， 培养后的灭菌(通入湿热蒸气)， 排液(输至下一工序)。 基因工程菌发酵的后处理技术 传统的发酵产品和基因工程产品在提取和精制上的不同，主要表现在下列方面： (1)传统发酵产品多为小分子，其理化性能，如平衡关系等数据都已知，因此放大比较有根据；相反，基因工程产品多是大分子，必要数据缺乏，放大多凭经验。 （2）基因工程产品大多处于细胞内，提取前需将细胞破碎，增添了很多困难。而且发酵液中产物浓度也较稀，杂质又多，加上一般大分子较小分子不稳定(如对剪切力)，故提取较困难，常需利用高分辨力的精制方法，如色层分离等。 （3）基因工程产蛋白提取的要求纯度更高，对于安全性的要求更为严格。 细胞的破碎 蛋白质的浓缩与分离 基因工程菌高密度发酵技术是基因工程技术生产应用的基础,其产品在化工、食品、环保、医药等方面都存在极大的潜在能力。但能否实现高密度培养及高目标产物浓度,是工程菌能否以较低成本实现规模生产的决定性因素。因此,必须结合高密度发酵的各个工艺条件,简化操作工艺,降低工业成本,最终使目标产物生产的规模化和产业化得以实现。 发酵的清洁生产 清洁生产：是关于产品的生产过程的一种新的、创造性的思维方式。清洁生产意味着对生产过程、产品和服务持续运用整体预防的环境战略以期增加生态效率并减降人类和环境的风险。 发酵工业废水的特点 营养丰富，浓度大 排放量大 改变原料 改进生产设备 改革生产工艺 循环利用冷却水 减少水、能量的消耗 分开不同类型的废水 提高水的回用，易于副产品回收 从酒糟和废母液中回收副产品 尽可能降低BOD和COD，获得经济效益 使用新的营养盐(如用液态氨代替尿素) 提高发酵产量、降低成本 更新热交换器 节约能量、水和蒸汽，提高冷却水回用 更新分离器 提高产量获得高价产品 建立水处理厂(如厌氧工程) 降低污染负荷，生产生物气体(甲烷) 发酵产品的成本因素 1. 菌株选育对发酵成本的影响 菌株的改良对于发酵成本的影响非常巨大，是发酵成本控制中非常重要的一环。 发酵单位高，副产物少，发酵周期短，通气量小，培养温度高，培养基转化率高，遗传稳定好等，是选育优良菌株所追求的目标。 2.培养基成本 培养基中，碳源用量最高，是成本控制的重点，而且天然碳源季节性强，往往需要发酵厂具有大容量储存设施，占用了场地和资金，而且容易变质。 选择培养基成分时，不止要考虑其价格和转化效果，还要考虑其物理性状，因为过于粘稠和杂质较多的培养基，会给通气、搅拌带来困难，增加能耗，并可能给后续提取造成困难，导致成本增加。 无机盐的选取，应尽量避免选用氯盐，因为氯具有较强腐蚀性，会增加设备损耗。 3.通气搅拌成本 在好氧发酵中，无菌空气的制备和搅拌的费用投入相当大。 不同菌株，不同培养基，不同生长阶段的发酵，其通气搅拌的需求也不同，会带来很大的成本差异。 以单细胞蛋白为例，以石油产品（甲烷、烃类）等为培养基，基质得率远高于碳水化合物，但在供氧和冷却费用方面同样也高的多，其最终生产成本仍然相对高出1.4~1.8倍。 通气搅拌的成本控制，主要在于发酵设备结构的设计和改进。 4. 温控成本 1）培养基的高温灭菌，淀粉的糊化和糖化。 2）设备的灭菌和冷却 3）