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茄果类亲缘关系RAPD研究进展 　　摘 要： 为了更准确地测定茄果亲本间的亲缘关系，提高育种效率，RAPD分子标记技术被广泛运用于茄果亲缘关系的研究中。本文综述了RAPD技术的原理和特点、茄果亲缘关系的试验方法以及聚类分析法研究进展，以利于人们对RAPD技术在茄果亲缘关系研究中的应用有更深入的了解。 　　关键词： 茄果； RAPD； 亲缘关系 　　茄果种质资源的遗传多样性和亲缘关系研究是开展茄果遗传改良、促进茄果生产可持续发展的重要基础工作。 　　茄果类蔬菜的种质资源极为丰富，种质资源亲缘关系研究是蔬菜育种工作的重要组成部分，而DNA分子水平上的遗传多样性更有助于阐明亲缘关系和正确分类。 　　随着新的有效的分子标记方法不断涌现，包括RAPD标记在内的各种基因型鉴定手段被广泛运用于植物种类研究中[1-2]。RAPD技术材料用量少，效率高，引物通用性和广泛性强，能直接反映DNA水平上的差异，且不受季节和环境条件的限制，在茄果类蔬菜品种亲缘关系的研究中被广泛应用。 　　1 概 述 　　RAPD技术是Williams等[3]在PCR技术的基础上建立的新型分子标记方法，采用人工合成的具有9～10个寡核苷酸的随机引物， 进行DNA扩增，扩增产物经琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶上电泳， 经EB染色后检测扩增产物的多态性。将RAPD分子标记结果进行分析，在DNA分子水平上为物种进化和分类提供了有力证据，对生物的品系（种）鉴别和起源演化方面的研究具有重要意义。 　　RAPD技术在引物足够多的情况下可以检测整个目标基因组的DNA多态性，通过不同引物反应基因组的遗传多样性，找到近缘种间的遗传物质差异，从而表达种质间的遗传差异，从基因水平上区分作物种间关系，明确鉴定其亲缘关系的远近，为茄果种质亲缘关系的确立提供科学依据。 　　韩永升等[4]采用RAPD技术对辣椒7个亲本和6个杂交组合进行遗传差异和亲缘关系的研究，经聚类分析，可把13个不同辣椒品系分为7个大类。朱海山[5]等用RAPD技术检测了27份番茄材料的遗传多样性，并对其进行了聚类分析，结果表明，供试品种被划分为6大类群，其分类与形态学上的分类基本一致。冉进等[6]利用RAPD技术对来源于国内外的53份参试茄子种质分为5大类群，其聚类结果与传统分类并不完全一致，与地理分布没有关系。 　　2 PCR-RAPD试验方法研究进展 　　以提取的符合试验要求的DNA为模板，筛选出扩增条带清晰且多态性较好的引物用于RAPD-PCR扩增，使用琼脂糖电泳法测定，在紫外光下检测PCR扩增产物并拍照。 　　RAPD技术使用的引物较短，要求退火温度较低，提高了引物和模板的配对几率和随机性，大大地提高了基因组分析的效率和多态性的检出，但也会导致标记的稳定性和可重复性差等缺点，因此RAPD试验条件的标准化十分重要。选择合适的RAPD引物，建立相对稳定的RAPD反应体系和扩增程序是RAPD技术应用的基础。 　　2.1 RAPD引物筛选 　　进行RAPD试验时，随机引物的正确选取对实现RAPD-PCR有效扩增十分关键，应选用多态性强、扩增重复性好、条带清晰且较多的引物。 　　李洪涛等[7]从上海申友公司生产的160个BS序列的随机引物中筛选得到36个在PCR扩增中多态性丰富的引物，从中选用了11个对27个供试材料进行扩增，全部得到了较丰富的多态性。Thul等[8]从40个RAPD随机引物中筛选出27个用于22个辣椒品种的鉴定和物种特异性描述。陈学军等[9]以辣椒属5个栽培种的13份材料中形态差异较大的2个供试材料DNA为模板， 进行RAPD随机引物的筛选，从120个引物中筛选出扩增条带清晰、重复性高的引物23个进行RAPD分析。李晴等[10]从115条RAPD随机引物中选出11条对37份辣椒材料进行PCR扩增， 得到多态性条带36条，以此分析辣椒遗传多样性和种质亲缘关系。Ince等[11]在RAPD-PCR反应的基础上利用2 760个RAPD分子标记，分析了辣椒属24个品种的亲缘关系。 　　2.2 RAPD-PCR反应体系 　　RAPD的基本反应程序就是PCR反应，模板DNA浓度、质量、引物浓度、Mg2+浓度、TaqDNA聚合酶的种类及浓度、反应程序等均会影响RAPD扩增结果，因而只有研究出最适反应体系，才能获得最理想的RAPD图谱。 　　由于不同的生物、不同的引物对反应体系的要求不同，在进行RAPD研究时，首先参照基本的反应体系进行PCR扩增，然后对扩增产物明显的引物进行反应体系的优化及其引物筛选，再进行遗传标记或遗传多样性等研究。 　　目前，针对不同茄果所采用的反应体系大同小异，应注重DNA浓度、MgCl2浓度、dNTP、Taq酶、引物浓度等方面的优化，以寻求最佳反应体系。 　　2.