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面向药物分析专业本科生实验教学 　　摘要：面向药物分析专业本科生开展高效液相色谱实验课程很有必要。课程的开设有助于学生理解高效液相色谱的基本概念和了解高效液相色谱技术在药物分析领域的应用情况，对扩大学生知识面，启发学生科研兴趣有利。 　　关键词：高效液相色谱；实验教学；本科生；药物分析 　　中图分类号：G642.4 文献标志码：A 文章编号：1674-9324（2013）24-0270-02 　　以培养具有创新性思维和较强动手能力、适应我国21世纪新药研究开发需要的药学人才为指导思想，药物分析课程旨在通过教学使学生了解新药质量标准制订的基本原理，掌握对已知结构的药物进行定性和定量测定的常见分析方法并在此基础上熟悉一些药物分析的新方法、新技术。实验教学是药物分析的重要环节，占有较大的比重，实验教学质量对学生加深理解和巩固所学的理论知识，正确熟练地掌握实验的基本操作和技能，培养学生良好的实验习惯、实事求是的科学态度和严谨细致的工作作风，培养学生掌握药物的质量控制和质量保证能力将起到重要作用[1，2]。因此，在药物分析的整个学习过程中要求学生既重视药品质量分析的基础理论知识的学习，又要重视实验技能的训练。我校药物分析教学始于1958年，在长期的教学过程中，我们不断总结教学过程，寻找问题，实施实验教学改革。 　　一、实验目的 　　通过高效液相色谱测定维生素A中视黄醇、视黄醛、视黄酸、维生素A醋酸酯的含量，了解高效液相色谱的测定原理以及与传统三点校正法相比较之下的优越性，熟悉高效液相色谱的使用，引导、培养学生的创新意识。 　　二、实验原理 　　高效液相色谱法[3，4]（high performance liquid chromatography，HPLC）是在20世纪60年代末期迅速发展起来的用于有机物定量分析的仪器分析方法。HPLC是在经典液相（柱）色谱的基础上，采用了由全多孔或非多孔高效微粒（1.7~10μm）固定相制备的色谱柱，由高压输液泵输送流动相，用高灵敏度检测器进行检测，实现了高柱效、高选择性、高灵敏度的快速分析，并成为有机物定量分析的主要分析工具。 　　三、实验 　　1.仪器和试剂。日本岛津LC-15C高效液相色谱仪，UV 2401-PC紫外分光光度计，维生素A醋酸酯标准品（Dr.Ehrenstorfer），美国sigma公司视黄醇、视黄醛、视黄酸标准品，甲醇（色谱纯），异丙醇（分析纯），环己烷（分析纯）试药维生素A软胶囊（上海东海制药），实验用水为去离子水。 　　2.溶液的配制。①供试品溶液，取样品20丸，挤出内容物，取0.1463g于10ml容量瓶，异丙醇溶解并定容至刻度，用甲醇稀释成14.63μg/ml进样分析。②对照品溶液，精密称取视黄醇、视黄醛、视黄酸和维生素A醋酸酯对照品适量，置容量瓶中，加异丙醇溶解并用甲醇定容至刻度，配制成各对照品浓度约为12μg/mL的混合对照品溶液。 　　3.实验内容。①对东海制药生产的维生素A软胶囊，按上述色谱条件测定，用外标法以峰面积计算含量，同时按照药典执行标准采用紫外分光光度法测定含量。2种方法测定结果见表1。②人工用对照品模拟样品，HPLC法测定结果见表2。 　　但是UV法只能测得Va醋酸酯含量，不能测得视黄醇、视黄醛和视黄酸的含量，具有一定的局限性。 　　四、总结 　　通过高效液相测定维生素A醋酸酯的含量与中国药典收录的三点校正法[7]的比较，发现HPLC法和三点校正法都能测定维生素A软胶囊中维生素A醋酸酯的含量，但是两种方法在应用范围上存在一定的区别。三点校正法适合纯度比较高的维生素A醋酸酯[5]，通过三点校正法虽然可消除某些杂质的影响，使得该法在Va制剂含量测定中始终发挥着重要作用，但是不能够单独测出维生素A中杂质的含量。HPLC法更适合纯度比较低的维生素A，而且能够单独测出某种特定的杂质的含量。在最新的研究发现，农药草达灭对大鼠体内维生素A代谢产物产生影响，因此对睾丸造成一定的毒性。HPLC法可以对动物体内维生素A及其代谢产物即视黄醇、视黄醛、视黄酸进行含量测定[6]，但是紫外三点校正法明显不行。因此HPLC法显示出其特有的优越性。HPLC法专属性更强，检测灵敏度更高，能更好对样品进行质量控制。分析实验课中开设高效液相色谱法和三点校正法测定维生素A含量的实验，可对同种目标分析物的不同分离方法进行比较，以加深学生对两种分离方法的理解，从而提高学生灵活运用分离分析方法的能力。目前国内相关院校已经相继给本科生开设了毛细管电泳的实验，但是关于该类教学实验的详细、全面报道很少。我们在积极给本科生开设了相关实验的同时，不断结合自己的科研成果，使其成为一个开放式实验，取得了较好的教学效果。 　　参考文献： 　　[1]于世林.高效液相色谱法技术与应用