共聚焦应用资料.docVIP

共聚焦显微镜成像图库 成像质量可能是评价任何光学仪器性能优劣的最合适的标准。这个图库包括了FV300和FV500在各种实验条件和扫描模式下拍摄的荧光图片。其中有几种情况，是未经过后期加工的光学截面扫描数据经过三维重建和其他技术处理所得到的。 ――― 果蝇成虫脑部 – 这一节的附图表示的是果蝇(melanogaster)成虫脑部通过共聚焦显微镜光学截面扫描，再进行三维重建所得图像。样本中的蕈形体(mushroom body)被绿色荧光蛋白GFP标记，绿色荧光部分非常突出。该图由东京都大学细胞遗传学院的Toshiro Aigaki提供。 如他们的名字一样，果蝇在他们的自然生活环境中以在腐烂变质的水果和蔬菜中存在的细菌和酵母为食。由于他们常常侵食重要的经济农作物，如草莓和土豆等，这些小生物通常被认为是农业害虫。然而在实验室体系中，果蝇则有另外的用处。由于繁殖和饲养非常简单，常见的果蝇被认为是一种最理想的实验材料。在过去50多年里，它已经被广泛利用于细胞和分子遗传研究，最近更成为发育生物学研究的基础物种(cornerstone species)。 蕈形体是high-order sensory assimilation和果蝇及其他昆虫研究的关键中心。通过利用共聚焦显微镜技术，特别是光学截面扫描、荧光标记和三维成像技术，现代对这些蕈形体的认识已经有了大幅度提高，这些方法也提供了极大量的果蝇其他方面显著的解剖学、生物学和生理学信息。此外，这些发现被结合起来，为更高层次的研究创造严谨的科学资源，如触须突触和其他微细结构的三维图，中央和周围神经系统的及其细致的神经解剖图，而且如果不使用共聚焦仪器，互动虚拟解剖程序interactive virtual dissection programs不可能得以实现。 ―――― 斑马鱼晶胚中的荧光蛋白表达 – 在双重、三重荧光标记试验中，或使用特殊的激光系统定位荧光表达的试验中，GFP蛋白的光谱多样性相当有用。这一节的附图是用红色荧光蛋白(dsRED)标记的斑马鱼晶胚作5μm连续光学截面所得的三维重建图。该图由日本大阪大学分子细胞生物所的Yasuhiro Kamei 和Shunsuke Yuba提供。 斑马鱼是一种体形小、耐寒的鱼类，存在一系列广泛的遗传突变体。标准“野生型”有些透明并且全身有纵长的黑色斑纹。虽然在热爱家庭养鱼的人士中也非常受欢迎，但是斑马鱼作为脊椎动物发育学、遗传学和疾病研究的模型可能才是最重要的。斑马晶胚在母体外发育，非常适合用于科研目的，并且从1970年代已经在世界各实验室广泛应用。由于饲养、操作和观察都很简单，可以利用斑马鱼和它的晶胚所获得的知识非常多。 共聚焦显微镜和荧光探针的发展完善了至关重要的斑马鱼晶胚数据积累。例如共聚焦技术，它已经能够在不需考虑厚度的前提下捕捉到斑马鱼样品的高分辨率图像；而荧光标记促进了对细胞个体行为在分裂和发育全过程中的追踪技术。这些显微工具在了解各种基因突变体的信息方面作为辅助工具同样非常有价值。对于在人类和其他脊椎动物中出现的类似的问题，这些信息有无可比拟的作用。 ―――― 人结肠腺窝 – 用Alexa Fluor488（绿色荧光）和TO-PRO-3（红色荧光）双重标记，这一节中人结肠腺窝的激光扫描共聚焦显微镜图像展示了非常显著的解剖学细节。该图由犹他州Huntsman癌症所Ray White实验室的Christine Anderson提供。 结肠是脊椎动物消化系统的一部分，是指大肠中从盲肠到直肠的部分。在人类当中，结肠的基本功能是分泌润滑液和贮存排泄物，同时吸收残留的盐分和液体。跟其他中空器官类似，结肠由四层组成：粘膜上皮细胞，粘膜下层，肌膜，和外膜（或浆膜）。称为腺窝的管状腺体延伸贯穿这四层膜。在腺窝底部的活性干细胞负责更新肠上皮细胞，这些上皮细胞是由几种不同类型的细胞组成的高代谢dynamic组织。 对结肠的研究很重要，这种研究在促进我们获得基础解剖学信息中扮演重要角色，同样对我们认识各种肠疾作出了重要贡献。共聚焦显微术和荧光探针对这些研究起了很大帮助作用，主要由于共聚焦能够对厚标本进行观察并保持高分辨率的能力、蛋白和其他类结肠结构的标记法、还有对细胞和组织的三维成像技术。例如结肠腺窝，它是半透明的，对荧光激光扫描共聚焦显微分析有独特的反应(particularly amenable)。它们在这种方法下的分离和检验显示出腺窝和腺窝周边的结构与功能对应关系的显著信息， ―――― 人皮肤组织 – 这一节的插图是一厚层的活性人皮肤组织，用水浸物镜以红外微分干涉法(IR DIC)观察约80μm厚度所得。该样品由一个近红外激光系统以750nm光作照明。这张引人瞩目的照片展示了激光扫描共聚焦显微镜与传统增大反差技术相结合所蕴涵的能力。 主要由两层组成的皮肤是