玉米白化突变体As—81647鉴定及基因定位.docVIP

玉米白化突变体As—81647鉴定及基因定位 　　摘 要：白化突变体As-81647是在自交系81647的自交后代中发现的自然突变体。光合色素含量测定表明，白化突变体叶绿素a、叶绿素b、叶绿素总量分别为正常植株的0.6%、5.8%和1.6%，推测光合色素含量的减少导致突变体光合作用强度减弱，无法利用光能进行营养生长，进而造成突变体产生白化表型，三叶期左右萎蔫死亡。组织细胞染色实验证实H2O2的积累可能是造成突变体细胞死亡的直接原因之一。本研究构建了As-81647杂合突变体与蒙自2的杂交F2分离群体，遗传分析表明该白化性状由一对隐性核基因控制，暂时命名为As-81647（Albino seeding-81647）。利用已公布的SSR分子标记和本实验室开发的分子标记，将该基因定位在玉米第3染色体umc1052和umc1641之间，遗传距离分别为0.7 cM和 2.8 cM 且与分子标记as47共分离。 　　关键词：玉米（Zea mays L.）；白化突变体；基因定位 　　中图分类号：S513.032 文献标识号：A 文章编号：1001-4942（2013）10-0012-04 　　高等植物中，植株叶色突变比较常见，该类突变体是研究植物光合作用、光形态建成等的理想材料[1～6]。此外，叶色突变极易识别，可作为标记性状应用于良种选育[7]和杂交育种[8]中。Gustafsson根据突变体苗期的叶色差异将叶色突变分为白化、黄化、淡绿、条纹和斑点五种类型[9]。其中，白化致死突变是叶绿素缺失突变体中缺失最彻底、最严重的一类，这种极端表型的突变体在机理研究方面具有更为重要的利用价值。目前在拟南芥[10]、玉米[11]、水稻[12，13]、烟草[14]等植物中均有白化突变体的报道。玉米突变体库MaizeGDB报道的177个叶色突变基因中，白化基因16个，黄白叶基因12个，这些基因的研究进展不一致，有些已定位到很小的区域，有些只初步定位到特定染色体上。16个白化基因及染色体定位结果为：w*-018-3（1）、w*-021-7（5）、w*-062-3（3）、w*-6577（1.06）、w*-8345（1.05）、w*-8889（9.03）、w*-8950（9）、w*-8954（6）、w*-9000（9.01）、w*-9005（4）、w20 white（1.05）、w24 white（1.06）、ij1 iojap striping1（7.03）、blh*-N2359（8.04）和blh*-N487C（1）； 12个黄白叶基因及染色体定位结果为：yg*-N2448（1.02）、v*-N308（5.05）、wl*-N1803（9）、wl*-N1982（8.05）、wl*-N311B（4.06）、wl*-N362B（6.02）、wl*-N4（3.05）、wl*-N44（5）、wl*-N47（1.06）、wl*-N56（1.06）、wl*-N60（1.06）、wlu7（1.05）和wlu9（5.05）。 　　本研究从玉米自交系81647中发现了白化突变体As-81647，此突变体从出苗到二叶或三叶期萎蔫死亡期间所有叶片均是白色，与我们之前报道的来源相同的黄化致死突变体nec-t[15]表型明显不同。本研究的主要目的是初步明确白化基因As-81647的遗传特点，确定其在染色体上的位置，为进一步研究白化突变体形成的机理奠定基础。 　　1 材料与方法 　　1.1 供试材料 　　本实验室选育的含白化突变基因的自交系81647（As-81647杂合突变体）和正常自交系蒙自2。 　　1.2 光合色素提取及含量的测定 　　1.2.1 光合色素的提取 利用95%乙醇离体法萃取二至三叶期玉米叶片光合色素[16]。 　　1.2.2 光合色素含量的测定 利用紫外可见分光光度计UV-2450分别测量提取液在波长665、649 nm和470 nm 下的吸光度。根据Lichtenthaler修正公式[17]计算各光合色素的含量。 　　1.3 组织细胞染色 　　1.3.1 台盼蓝（Trypan blue）染色 将植株叶片浸泡在台盼蓝溶液中（每1 ml乳酚中溶解2.5 mg 台盼蓝粉末），沸水浴染色10 min，室温染色12 h，水合氯醛（2.5 g/ml）中脱色3～4 d 。解剖镜（Olympus， SZX12）下观察、照相。 　　1.3.2 二氨基联苯胺（Diamino benzidine， DAB）染色 将DAB溶于蒸馏水中，使终浓度为1 mg/ml，盐酸调pH至3.8。剪取长度为5 cm 的叶片，浸透于DAB溶液中，光照培养箱反应8 h。剪取中间3 cm 置于75%酒精中煮沸，脱色。解剖镜（Olympus， SZX12）下观察、照相。 　　1.