废丝废茧蛋白对小球藻和四尾栅藻生长影响.docVIP

废丝废茧蛋白对小球藻和四尾栅藻生长影响 　　摘要：缫丝汰头中含有丰富的废丝废茧蛋白质。采用酸水解法得到的游离氨基酸水解度为87.33%。利用单因素试验设计研究氨基酸水解液添加量、温度和通氧量对小球藻（Chlorella）和四尾栅藻（Scenedesmus quadricanda）生长的影响。结果表明，氨基酸水解液的添加量为5.00%、温度25 ℃、通氧量1.5 L/min的条件对小球藻和四尾栅藻的生长有极大的促进作用。 　　关键词：缫丝汰头；氨基酸水解液；小球藻（Chlorella）；四尾栅藻（Scenedesmus quadricanda）；细胞密度 　　中图分类号：S968.41 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2013）09-2107-04 　　种桑养蚕以及桑蚕丝加工一直是我国的优势产业，随着缫丝产业的蓬勃发展，缫丝汰头废水排放是目前缫丝企业所面临的一个重要问题。一方面缫丝厂废弃蛋白的排放会对自然环境造成一定的污染，另一方面废弃蛋白中珍贵的蚕丝蛋白质资源被浪费[1-4]。如果能有效地利用缫丝废弃蛋白质生产鱼塘氨基酸肥水剂，不但可以减轻缫丝厂传统废弃物处理的成本和压力，而且还能切实开辟缫丝废弃物的全新使用途径。从汰头中提取丝胶的方法有化学提取法和物理提取法两大类[5]，得到的粗丝胶蛋白可与废丝一起水解，蚕丝水解采用微波、酸、碱、氯化钙和酶等[6-11]。水解后可得到16种氨基酸的混合物，其中包含6种人体自身不能合成的氨基酸，因此可以用于食品和化妆品的添加剂，一些含量较高的氨基酸还具有药用价值。 　　氨基酸肥水剂由多种氨基酸、营养盐、微量元素、维生素及酵素菌等多种活性物质和生长因子组成，通过激活有益微生物繁殖和激活藻类细胞分裂及孢子萌发，促进单细胞藻类新陈代谢，协调藻相与菌相平衡，促使水体迅速肥沃和维持水质稳定，丰富水体天然饵料，提高鱼虾幼苗成活率，促进鱼虾生长。同时能有效防止浮头或翻塘，降低水中氨氮、亚硝酸盐、硫化氢等有毒物含量，减少疾病发生。氨基酸肥水剂产品越来越受到社会各界的普遍欢迎。 　　试验所选的小球藻（Chlorella）和四尾栅藻（Scenedesmus quadricanda）同属绿藻门（Chlorophyta），是鱼类在不同生长时段可利用的天然水生饵料。小球藻作为单细胞微藻的一种，直径3～8 μm，富含蛋白质、不饱和脂肪酸、类胡萝卜素、叶黄素、虾黄素和多种维生素，具有极高的营养价值和提高免疫力的功能[12]，可作为鱼类的开口饲料。四尾栅藻作为栅藻类的一种，直径10～24 μm，能为鱼类快速生长过程提供营养。本研究利用缫丝废弃蛋白中回收的蛋白质为材料，利用酸水解法得到氨基酸水解液，用氨基酸水解液代替无机盐NaNO3提供氮源，研究氨基酸水解液的添加量、温度和通氧量对小球藻和四尾栅藻生长的影响。 　　1 材料与方法 　　1.1 试验材料与仪器 　　缫丝汰头来自广西鸿艺丝绸有限公司，小球藻和四尾栅藻购自中国科学院水生生物研究所。 　　主要试剂：H2SO4、NaOH、HCl、甲醛、石油醚等均为分析纯，试验用水为蒸馏水。 　　主要仪器：PHS-25CW型pH计（上海理达仪器厂）、XYJ80-1型离心机（江苏省金坛市正基仪器有限公司）、DMB5电子显微镜（麦克奥迪实业集团有限公司）、LRH-250培养箱（广东省医疗器械厂）、HP-1000通氧机（广东中山创新电器有限公司）。 　　1.2 试验方法 　　1.2.1 丝胶蛋白的回收 采用酸析法与离心法相结合，在缫丝汰头废水中加入稀HCl，调整pH为3.8～4.5，在等电点条件下使丝胶蛋白质絮凝而逐渐沉淀分离[5]。取沉淀后的溶液4 000 r/min离心30 min，用抽滤装置进行浓缩，按固液比（m/V，g/mL，下同）为1∶10向沉淀中加入石油醚，6 ℃下密封静置24 h，然后置于低于40 ℃的鼓风干燥箱中干燥至恒重，即为粗蛋白粉。将缫丝汰头废丝用清水洗净，置于低于40 ℃的鼓风干燥箱中干燥至恒重。 　　1.2.2 丝蛋白的水解 称取1.0 g缫丝汰头废丝和1.0 g粗蛋白粉置于500 mL蒸馏瓶中，按固液比1∶60加入3.5 mol/L的稀H2SO4溶液，恒温加热搅拌器110 ℃反应9 h[13]，冷却，用Ba（OH）2完全中和。将中和滤液减压过滤，取上清液4 000 r/min离心30 min，彻底除去BaSO4沉淀，得到溶液即为氨基酸水解液。水解度以水解液中氨基氮与废弃蛋白中总氮的百分比表示[14]。 　　1）考察氨基酸水解液添加量对小球藻和四尾栅藻生长的影响。试验设置8个氨基酸水解液处理组和1个BG11培养液对照组。氨基酸水解液处理组用pH 7.0的氨基酸水解液替代BG11培养液中的NaNO3，分别添加0.25%、0.5