程序性死亡与细胞凋亡.pptVIP

第十三章 程序性细胞死亡与细胞衰老 第一节 程序性细胞死亡 二、细胞凋亡的特征 1、凋亡的起始 2、凋亡小体的形成 3、凋亡小体逐渐被邻近的细胞或体内吞噬细胞所吞噬，凋亡细胞的残余物质被消化后重新利用 Hayflick limitation Cell will be dead; The life is limited; Proliferation is limited. 细胞坏死初期，胞质内线粒体和内质网肿胀、崩解，结构脂滴游离、空泡化，蛋白质颗粒增多，核发生固缩或断裂。 随坏死进程，细胞质呈强嗜酸性，苏木精/伊红染色呈均一红色。 细胞膜不完整，台盼蓝染色阳性(活细胞不着色)。 DNA随机降解，细胞内容物流出，引起炎症。 （二）细胞凋亡 ①细胞通过出芽的方式形成许多凋亡小体； ②凋亡小体内有结构完整的细胞器； ③不引起炎症； ④线粒体无明显形态变化，溶酶体活性不增加； ⑤内切酶活化，DNA有控降解，凝胶电泳图呈梯状； ⑥凋亡通常是生理性变化，坏死是病理性变化。 * * * * * 诺 一、细胞程序性死亡的概念 细胞程序性死亡（PCD）是一种基因指导的细胞自我消亡方式。 PCD和细胞凋亡的区别在以下方面： PCD是功能性概念，凋亡是形态学概念。 PCD的最终结果是凋亡，但凋亡并非都是程序化的。 PCD存在于胚胎发育过程中。 C. elegans是研究PCD的理想材料（生命周期短，细胞数量少）。 C. elegans雄虫有1031个体细胞、约1000个生殖细胞。 神经系统由302个细胞组成，来自于407个前体细胞，105个细胞发生了PCD。 控制线虫PCD的基因有：Ced-3、Ced-4和Ced-9。 Ced-3和 Ced-4诱发凋亡； Ced-9抑制Ced-3、Ced-4的作用。 2002年10月7日英国人Sydney 、美国人Horvitz和英国人Sulston ，因在PCD方面的研究获诺贝尔生理与医学奖。 H. Robert Horvitz John E. Sulston Sydney Brenner 三、细胞凋亡的生理和病理学意义 （一）生理学意义 1. 生长发育：组织与器官的塑造（趾的分化）；动物变态；皮肤角质形成； 2. 免疫细胞分化：克隆选择； 3. 防御：清除衰老细胞、DNA损伤的细胞、和被病原体感染的细胞。 Sculpting the digits in the developing mouse paw by apoptosis（Wood 2000） （二）病理学意义 1. 病原体侵染； 诱导凋亡——HIV 抑制凋亡——Poxvirus 2. 细胞凋亡不足 肿瘤，自身免疫疾病； 3. 细胞凋亡过度----免疫功能丧失 神经退行性疾病（AD，帕金森症）、心肌梗塞、 再生障碍性贫血、骨组织坏死。 四、细胞凋亡的检测方法 1. 形态学，电镜，光镜； 2. DNA凝胶电泳——ladder； 3. 流式细胞计---检测丢失DNA的亚二倍体； 4. TUNEL技术----DNA断裂的原位末端标记法，对DNA分子断裂缺口中的3‘-OH进行原位标记； 5.彗星电泳法-----原理：将单个细胞悬浮于琼脂糖凝胶中，经裂解处理后，再在电场中进行短时间电泳，并用荧光染料染色。凋亡细胞的DNA讲解片段泳动速度较快，使细胞核呈现出一种彗星式的图案，正常无DNA断裂的细胞核呈圆球形。 8. 常用检测细胞凋亡的染料： 二乙酸荧光素（FDA），绿色荧光，活细胞染色。 Hoechst 33342或33258，DAPI，吖啶橙（AO），半通透，凋亡和固定后的细胞荧光较强。 溴化乙啶（EB）、碘化丙啶（PI）、放线菌素D（7-AAD），不通透，正常和凋亡细胞拒染。 可用不同性质的染料对凋亡细胞进行双染色。 第二节　细胞衰老 Aging ，Senescence，指细胞随着年龄增加，机能和结构退行性变化，趋向死亡的不可逆现象。 衰老是生命的普遍现象，发生在生态系统、群落、种群、个体、细胞以及分子等不同层次。 Ages 一、人体细胞的动态分类 更新组织：如上皮细胞、血细胞。构成更新组织的细胞可分为３类：① 干细胞、 ② 过渡细胞、 ③成熟细胞。 稳定组织：可补偿性增生，如：肝、肾细胞。 恒久组织：细胞不再分裂，如神经细胞。 可耗尽组织：如人类的卵巢实质细胞。 二、细胞衰老的特征（一）形态变化 （二）分子水平的变化 1.?DNA：复制与转录受阻，端粒DNA、mtDNA缺失。DNA氧化、断裂、缺失和交联，甲基化程度降低。 2.? RNA：含量减少。 3.?蛋白质：含成下降，发生修饰、交联。 4.? 酶分子：物理与化学特征改变，酶失活。 5.?脂类：不饱和脂肪酸被氧化。 三、细胞衰老的分子机理 1. 代谢废物积累：如：脂褐质（自由基诱发的脂质过氧化