草地早熟禾与青海扁茎早熟禾过氧化物同工酶比较分析.docVIP

草地早熟禾与青海扁茎早熟禾过氧化物同工酶比较分析 　　摘要：采用聚丙烯酰胺凝胶垂直平板电泳（PAGE）技术对草地早熟禾（Poa pratensis L.）和青海扁茎早熟禾（Poa pratensis var. cv. Qinghai）的过氧化物酶（POD）同工酶进行检测和分析，从生化水平探讨两者的亲缘关系及遗传差异。结果表明，草地早熟禾与青海扁茎早熟禾在幼叶期、旗叶期的酶谱分别具共有带8条、6条，其酶带数量、带级、位点及活性强度各不相同，形成了各自特有的酶谱特征。在幼叶期，青海扁茎早熟禾具1条特征谱带，而草地早熟禾没有；在旗叶期，草地早熟禾具3条特征谱带，而青海扁茎早熟禾没有。利用这些酶谱特征找出供试材料间的细微差异是可行的，是两者进行生化水平鉴定的有利指标。 　　关键词：草地早熟禾（Poa pratensis L.）；青海扁茎早熟禾（Poa pratensis var. cv. Qinghai）；POD同工酶；聚丙烯酰胺凝胶电泳 　　中图分类号：S54 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2013）16-3901-04 　　草地早熟禾（Poa pratensis L.）属于禾本科早熟禾属的多年生草本植物，具有直伸或匍匐的根茎，且根茎繁生力强，耐牲畜践踏，营养丰富，是各种牲畜喜食的优质牧草[1-3]。青海扁茎早熟禾（Poa pratensis var. cv. Qinghai）为草地早熟禾的变种，是青海省畜牧兽医科学院草原研究所驯化选育出的青藏高原首个根茎型野生栽培新草种，具有根茎发达、分蘖性强的特性，固土保水能力很强。草地早熟禾和青海扁茎早熟禾均既能进行种子繁殖也能进行根茎无性繁殖，具有极强的抗寒性和耐旱性，是青藏高原高海拔地区人工草地建设和改良、水土保持以及生态环境建设的首选草种，尤其适合三江源区“黑土型”退化草地植被的恢复与重建[4-8]。 　　青海扁茎早熟禾为草地早熟禾的变种，二者的形态特征较为相似，可作为分类依据的器官结构较细微，受环境影响变异性较大，故形态学变异很难反映其遗传差异。而目前对青海扁茎早熟禾遗传特性及杂交育种的研究少有报道，关于其与草地早熟禾在生化水平上的遗传研究则未见报道。本研究通过对不同生育期的草地早熟禾与青海扁茎早熟禾的POD同工酶进行分析，从生化水平上探讨其亲缘关系及遗传差异，为该生态草???的深入研究及合理的开发利用提供依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 供试材料 　　试材草地早熟禾和青海扁茎早熟禾种子由青海省畜牧兽医科学院草原研究所提供。于2010年10月将材料播种于花盆，各材料均设3次重复，室内土培。于2010年11月和12月分别采取其健康幼叶和旗叶作为试验材料。 　　1.2 试验方法 　　1.2.1 样品制备 分别称取草地早熟禾和青海扁茎早熟禾的叶片（幼叶和旗叶）各0.4 g，洗净用滤纸吸干水分，剪碎置于预冷的小研钵中，滴入1.8 mL提样缓冲液，在冰浴中研磨匀浆，移入离心管中，10 000 r/min，4 ℃，离心15 min，取上清液0.5 mL加入等量的样品处理液备用。 　　1.2.2 电泳 采用聚丙烯酰胺凝胶垂直平板电泳技术[9]，分离胶浓度为7.5%，浓缩胶浓度为3.0%。电极缓冲液为Tris-Gly缓冲液（pH 8.3），每槽上样量为20 mL。电泳时，采取稳流电泳，浓缩胶电压为200 V，分离胶电压为220 V，温度4 ℃，恒压电泳至溴酚蓝迁移到距凝胶末端1.0 cm处为止。 　　1.2.3 染色、固定及照相 联苯胺法染色[9]，呈现酶带后取出凝胶，用水漂洗终止染色，用生物凝胶成像系统照相。根据同工酶迁移率Rf值（Rf=酶带的迁移距离/前沿指示剂的迁移距离）绘制模式图，标定酶带位置。 　　2 结果与分析 　　2.1 草地早熟禾与青海扁茎早熟禾幼叶期的POD同工酶酶谱特征 　　2.1.1 酶带及酶谱分布特征 由图1可知，两种试材的POD同工酶经电泳后，显示的酶谱带8～9条不等，从酶谱表征可以看出，草地早熟禾与青海扁茎早熟禾的酶谱上有8条共同的谱带，同类品种的酶谱具有较稳定的相似性。把它们分成A、B、C、D 4个区，其中A区有1条酶带，染色较深，两种植物均有表现；B区有2条酶带。C区酶带数2～3条不等，该区染色最深，活性最高；D区有3条酶带，染色较浅。C1是青海扁茎早熟禾幼叶的特征谱带（Rf=0.23），而草地早熟禾没有这条谱带。 　　2.1.2 酶的活性与含量 酶带的染色深浅在一定程度上也反映酶活性的强弱不同。本试验中，草地早熟禾与青海扁茎早熟禾的POD同工酶染色深浅不同，前者较后者染色深，说明草地早熟禾的POD同工酶活性较强，而扁茎早熟禾的活性较弱。 　　2.1.3 POD酶谱的迁移率 由表1可知，草地早熟禾与青海扁茎早熟禾