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超声波法提取马鞭草黄酮条件优化及其抗菌活性研究 　　摘要：采用超声波法提取马鞭草（Verbena officinalis）中总黄酮，设计单因素试验和正交试验考察超声波功率、乙醇体积分数、超声波处理时间和料液比对总黄酮提取效果的影响，优化提取工艺条件。并采用纸片琼脂扩散法考察马鞭草提取物对几种微生物的抑制作用。结果表明，优化的马鞭草总黄酮提取条件为乙醇体积分数60%、超声波功率350 W、超声波处理时间50 min、料液比m马鞭草∶V乙醇=1∶30（g/mL）。抑菌试验表明，马鞭草黄酮类化合物对大肠杆菌（Escherichia coli）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、白假丝酵母（Candida spp.）、青霉（Penicillium citrimum）、黑曲霉（Aspergillus niger）均有一定的抑制作用。 　　关键词：超声波法；马鞭草（Verbena officinalis）；黄酮类化合物；抑菌活性 　　中图分类号：S567.23+9 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2013）03-0645-04 　　马鞭草（Herba Verbenae）为马鞭草科（Verbenaceae）植物马鞭草（Verbena officinalis）的地上部分，具有活血散瘀、截疟、解毒及利水消肿等功效，主治症瘕积聚、经闭痛经、疟疾、喉痹、痈肿、水肿、热淋等症[1]。近年来对马鞭草活性组分的研究多有报道，其所含化学成分种类较多，主要有环烯醚萜、黄酮、三萜、甾体等[2-5]。黄酮类化合物是广泛存在于植物中的一类重要的化合物，其生物活性多种多样，如对心血管系统的作用、抗肝脏毒性、抗炎及提高机体免疫力、雌激素样作用、抗菌及抗病毒、抗氧化作用等，在食品和医药工业领域应用广泛[6]，因此对马鞭草中黄酮类化合物的研究具有重要意义。传统的黄酮类化合物提取方法主要有醇渗漉法、浸渍法、索氏抽提法和加热回流法等，存在提取时间长、溶剂用量大、提取率低等问题。近年来，超声波提取法因具有设备简单、操作时间短、效率高等优点而得到广泛使用[7，8]。为了更好地开发利用马鞭草，本研究利用超声波法提取其总黄酮，采用单因素试验和正交试验优化提取工艺，并对马鞭草提取产物进行体外抑菌试验，以期为该资源的利用和开发提供参考。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料与仪器 　　马鞭??干全草购自保定市中药材公司，经粉碎后过60目滤网，得到预处理的马鞭草粉末。供试微生物菌株由河北大学病原微生物实验室提供，包括大肠杆菌（Escherichia coli）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、白假丝酵母（Candida spp.）、青霉（Penicillium citrimum）、黑曲霉（Aspergillus niger），细菌采用LB培养基培养，酵母及霉菌采用通用真菌培养基YEPD。 　　主要仪器包括超声波破碎仪、752型紫外可见分光光度计、电子天平、离心机、粉碎机等。 　　1.2 试验方法 　　1.2.1 标准曲线的绘制 参照文献[9]，以芦丁为标准品，测定其不同浓度标准液在507 nm处的吸光度，绘制芦丁标准曲线，以标定提取液中总黄酮含量。 　　1.2.2 马鞭草总黄酮类化合物的提取 将马鞭草粉末在60 ℃下烘干12 h，精确称量2.00 g，加入50 mL一定浓度的乙醇溶液，置于超声波细胞粉碎仪内进行超声波辅助提取。为避免超声波处理过程中温度升高过快，破坏其中活性产物，超声波处理过程中使用冰浴降温。处理结束后除去固体杂质，收集滤液，滤液经减压蒸馏浓缩后8 000 r/min离心10 min以进一步除去固体杂质，得粗提物，置于100 mL容量瓶中定容，为待测溶液，4 ℃冰箱保存备用。 　　1.2.3 单因素试验 设置单因素试验考察超声波功率、乙醇体积分数、超声波处理时间和料液比（m马鞭草∶V乙醇，g/mL）对马鞭草中总黄酮提取率的影响。①超声波功率。准确称取6份马鞭草粉末各2.00 g置于锥形瓶中，加入50.00 mL 体积分数50%的乙醇溶液作为溶剂，设定超声波功率分别为200、250、300、350、400、450 W，超声波提取30 min，提取温度30 ℃，提取液定容到100 mL，测定总黄酮含量。②乙醇体积分数。准确称取6份马鞭草粉末各2.00 g置于锥形瓶中，分别加入50.00 mL体积分数40%、50%、60%、70%、80%、85%的乙醇溶液作为溶剂，设定超声波功率300 W，超声波处理时间30 min，提取温度30 ℃，浸提液定容到100 mL，测定总黄酮含量。③超