液相色谱串联质谱法实现二氨基甲苯同分异构体分离鉴别.docVIP

液相色谱串联质谱法实现二氨基甲苯同分异构体分离鉴别 　　摘要：以ZORBAX Eclipse XDB-C18 Analytical 4.6mm×150mm，5-Micron柱为分析柱，甲醇-水为流动相，建立了高效液相色谱质谱联用仪测定生态检测中禁用芳香胺2，4-二氨基甲苯以及其同分异构体的方法。确定了质谱的最佳检测条件，碰撞电压为19ev和20ev；液相分离的最佳洗脱条件，用时为20min和15min。本方法简单、准确，适用于日常生态检测。 　　关键词：2，4-二氨基甲苯；同分异构体；液相色谱质谱联用仪 　　偶氮染料是纺织品服装在印染工艺中应用最广泛的一类合成染料，用于各种天然和合成纤维的染色和印花等。在与人体皮肤长期接触后，会与代谢过程中释放的成分混合并产生还原反应分解生成20多种致癌芳香胺，其中2，4-二氨基甲苯就是禁用芳香胺其中的一种[1-4]。2，4-二氨基甲苯有5种同分异构体，分为2，3-二氨基甲苯，2，5-二氨基甲苯，2，6二氨基基本，3，4-二氨基甲苯，3，5-二氨基甲苯（市场没有销售，不以考虑）。为了消除同分异构体对2，4-二氨基甲苯的干扰，我们分别使用液相色谱、液相色谱质谱对其同分异构体进行了鉴别和分离，从而保证了对禁用2，4-二氨基甲苯的准确判断。 　　1 试验部分 　　1.1 主要仪器与试剂 　　液相色谱串联质谱仪：6490 Tripe Quad LC /MS型，美国安捷伦公司； 　　超声发生器：575HT AE CREST公司； 　　电子天平：XS105DU METTLER TOLEDO公司； 　　甲醇：色谱纯 CNW公司； 　　2，4-二氨基甲苯标准品：标准品，德国Dr.E公司； 　　2，3-二氨基甲苯标准品：标准品，德国Dr.E公司； 　　2，5-二氨基甲苯标准品：标准品，德国Dr.E公司； 　　2，6二氨基甲苯标准品：标准品，德国Dr.E公司； 　　3，4-二氨基甲苯标准品：标准品，德国Dr.E公司。 　　1.2 仪器分析条件 　　（1）液相色谱条件 　　色谱柱：ZORBAX Eclipse XDB-C18 Analytical 4.6mm×150mm，5-Micron柱；柱温：40℃；流动相：水（A），甲醇（B）。进样体积为5μL，对#08（2，6）、#08（2，4）、#08（2，3）混标进行分离、梯度洗脱条件见表1。 　　流速：0.3mL/min；进样量2μL；流动相：水（A），甲醇（B），进样体积为2μL，对#08（2，5）、#08（3，4）、#08（2，3）混标进行分离、梯度洗脱条件见表2。 　　（2）高效液相色谱检测器的选择 　　由于二氨基甲苯能够产生紫外吸收，因此选用常用的二极管阵列紫外检测器（DAD），在240nm、280nm、350nm波长下进行测试。根据在各个波长下检测物的响应值大小，最终选用波长为240nm。 　　（3）质谱分析条件 　　离子源：电喷雾离子源（ESI+）；扫描方式：正离子扫描；检测方式：子离子扫描（Pro）；干燥气温度：325℃；干燥气流速：11L/min；雾化器压力：20 Psi；毛细管电压：3500V；对于所有的目标化合物，进行条件的优化。 　　1.3 样品前处理 　　分别称取适量的各标物，配制成1000ppm的储备液，以色谱纯甲醇为溶剂，超声使其充分溶解，逐级稀释成20ppm的中间工作液和4ppm的标准工作液备用。 　　2 结果与讨论 　　2.1 仪器条件的优化 　　为了迅速找到各个同分异构体的差异，我们在不接色谱柱的条件下对各个同分异构体进行质谱条件的优化选择。首先在其他仪器条件不变的情况下，优化各个同分异构体的碰撞电压。分别选择17ev、19ev、20ev、22ev条件下对各个物质进行打碎，最终得到各个同分异构体最佳碰撞电压，见表3。 　　针对表3可以发现，二氨基甲苯各个同分异构体的最佳碰撞电压为19 ev和20 ev。 　　在各自最佳条件下得到的各个同分异构体的特征碎片离子见表4。 　　M（二氨基甲苯）=122，123为[M+H]+。 　　2.2 优化洗脱梯度后的混标分离图 　　在了解各个同分异构体的特征离子后，在最优化的质谱条件下对液相的洗脱梯度进行优化，以保证各个同分异构体的分离，消除对禁用芳香胺2，4-二氨基甲苯的干扰。首先选用流动相为常见的容易得到的水和甲醇，使用ZORBAX Eclipse XDB-C18 Analytical 4.6mm×150mm，5-Micron柱，通过改变甲醇和水的比例进行液相条件优化，最终得到的最佳洗脱梯度如表1、表2所示，在最佳优化条件下的各个同分异构体的分离谱图如下所示。 　　表1条件下#08（2，6），#08（2，4）、#08（2，3）混标的