郑州大学药物分析课件：第七章色谱法.pptVIP

吸附剂活性级别 氧化铝含水量(%) 0 3 6 10 15 ? 硅胶含水量(%) 0 5 15 25 38 ?  活性及级别 　　 Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅲ Ⅴ 注：一般选用II、III活性级别的吸附剂 氧化铝板 氧化铝G 氧化铝H 氧化铝HF254 氧化铝GF254 硅胶 (Sio2·XH2O) 硅胶H 硅胶G 硅胶60G 硅胶HF254 硅胶GF254 2cm 1.5cm 例1：头孢拉定、头孢氨苄等头孢类的鉴别 硅胶G薄层板 展开剂：0.1m枸橼酸/0.2M磷酸氢二钠/丙酮(60：40：1.5) 显色剂：0.1%的茚三酮溶液 规 定：供试品主斑点应与 对主斑点一致 样品 对照品 例2：硫酸庆大霉素的鉴别(Chp2000.BP2000) 硅胶G薄层板（ 105℃活化2hr） 展开剂：氯仿/甲醇/氨（1：1：1） 显色剂：I2蒸气 规 定：供试品主斑点应与标准品溶液所显 斑点一致。 例：甾体激素药物中杂质“其它甾体的检查”（供试品3mg/ml） 薄层板：硅胶G或硅胶GF254或硅胶HF254 展开剂：二氯乙烷—甲醇—水 溶 剂：氯仿 显色剂：碱性四氮唑蓝或20%.HF04 规 定：供试品杂质斑点不得多于2个， 其颜色与对照液（60mg/ml）相比， 不得更深。 例：六味地黄丸中、山朱萸的含量测定 薄层板：硅胶G板 展开剂：环已烷/氯仿/醋酸乙酯/甲酸 (20:5:8:0.1) 溶 剂：乙醇 显色剂：10%.H2SO4溶液 测定法：薄层扫描、波长λS=520nm λR=700nml 测定供试品与对照品吸收度积分值 规 定：水蜜丸每1g不能少于0.2mg 被测样品在和固定液的接触过程中，发生多次溶解—挥发过程，不同组分，在固定液中溶解不同，因此出柱的时间不一，各组分彼此分开。 载气 A+B A B A B 检测 器 A B * * 第七章 色谱法 色谱法：利用物理或化学的方法将混合物组分分开然后进行鉴别和定量的方法 原理:相对运动的两相 利用混合物中各组 分与两相亲和力不同而分开。 ［用途］：用作药物的鉴别、含量测定、杂质检查等方面 ［特点］：高灵敏度，高选择性 高效率、应用范围广 流动相 固定相 ［分类］：根据操作条件的不同分类 柱色谱法 纸色谱法 薄层谱法 气相色谱法 高效液相色谱法 第一节 柱色谱 一、柱色谱的组成及分离原理 1、组成：玻璃管：高径比20~30：1 固定相：Al2O3 或硅胶（sio2XH2O ） 流动相：各种极性的有机溶剂（洗脱剂） 2、分离原理： 混合物 色谱柱 分别收集 A(极性大) B(极性中) C(极性小) 洗脱剂 影响分离因素： （1）各组分极性 （2） 洗脱剂极性 （3）吸附剂的活性 A(最后出柱) B(第二出柱) C(首先出柱) 显色 荧光 分段 3、吸附剂和洗脱剂的选择 （1）??? 吸附剂 碱性：PH=9~10用于烷烃、胺、生物碱 氧化铝 中性：PH=7.5 用于醛、酮、醌、酯 色谱专用 粘度：100-150目 酸性：PH=4-4.5 用于有机酸的分离 （2）溶剂和洗脱剂 溶剂的要求：①不与吸附剂起化学反应 ② 极性小，用量体积小可溶解样品。 洗脱剂：极性适中使各组分分开 极性：石油醚（烷烃）＞苯＞乙醚＞氯仿＞丙酮＞醇＞水＞酸，必要时采用混合溶剂或梯度洗脱。 二、实验步骤： 1、装柱 干法 湿法 （1）柱均匀不能有气泡裂缝 （2）上层盖脱脂棉、滤纸 （3）上端保持一段溶剂 （4）吸附剂高度为 混合物 注意事项 2、加样及洗脱 分段收集洗脱液 纯品 注意事项：（1）连续加入吸脱剂防止干涸； （2）采用等分收集洗脱液； （3）控制洗脱剂流出速度 色谱分离过程 三、应用实例：1、维生素K1注射液的含量测定（Ch.P2000） 维生素K1