222动物细胞融合与单克隆抗体上课用.pptVIP

* 2.2.2动物细胞融合与单克隆抗体 * 预习、思考下列问题： 1、什么叫动物细胞融合？植物体细胞杂交技术与动物细胞融合有什么不同呢？ 2、动物细胞与植物细胞在结构上有何区别？这与它们杂交或融合过程有什么影响？ 3、动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理是否相同？两者的融合过程是否也一样？ * 杂种植株 融合的原生质体AB 再生出细胞壁 脱分化 愈伤组织 再分化 植物细胞的融合 植物组织培养 植物细胞A 原生质体B 原生质体A 杂种细胞AB 去 壁 去 壁 人 工 诱 导 方法？ 促进融合的方法？ 融合完成的 标志 植物细胞B 植物体细胞杂交技术 植物体细胞杂交结束的 标志 * 植物体细胞杂交的意义： 打破生殖隔离，克服远缘杂交不亲和的障碍，培育作物新品种。 * 一、动物细胞融合 ㈠概念：两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。又称为细胞杂交。融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞，称为杂交细胞。通过动物细胞的培养，杂交细胞表现出两个亲本的特点。 * 细胞A 细胞B 杂种细胞 灭活的病毒 物理法 化学法 仙台病毒 疱疹病毒 新城鸡瘟病毒 * ㈡诱导方法 物理法： 化学法： 生物法： 灭活的病毒 同植物体细胞杂交技术 思考讨论： 为什么细胞融合过程中使用的病毒需要灭活？不灭活行吗？ 因为灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合，不灭活的话会感染细胞，而不能诱导细胞融合。 * 仙台病毒 紫外线 丧失感染性 （不感染细胞） 保留融合活性 （诱导细胞融合） 诱导细胞融合的仙台病毒的优点？ （融合率较高，对各种细胞都适宜。） * ㈢动物细胞融合过程 * 灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面 细胞膜被病毒颗粒穿通 细胞膜连接 细胞融合，形成杂种细胞 ㈢用灭活的病毒诱导动物细胞融合过程 具有两个细胞的遗传信息。 融合结束的标志？ （说明了细胞膜具有一定的流动性） * 想一想 在动物细胞融合的实际操作过程中，是只用单个的两种细胞来融合吗？ * 思考讨论： 1、动物细胞融合的优点？ 2、动物细胞融合技术应用于哪些方面？ 细胞遗传、细胞免疫及制备单克隆抗体等。 突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能。 * 主要用于制备 单克隆抗体等 获得杂种植株 用途 物理、化学方法 （同左） 灭活的病毒 物理（离心、振动、电刺激） 化学（聚乙二醇） 诱导方法 使细胞分散后诱 导细胞融合 去除细胞壁后诱 导原生质体融合 细胞融合的方法 细胞膜的流动性 细胞膜的流动性、 植物细胞全能性 原理 动物细胞融合 植物体细胞杂交 比较项目 植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较 * 二、单克隆抗体 读下面一段文字资料，思考以下问题： 长期以来，为了获得抗体，采用的是把某种抗原反复注射到动物体内，然后从动物血清中分离出所需抗体的方法。用这种方法获得的抗体，不仅产量低，而且抗体的特异性差，纯度低，反应不够灵敏。人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的B细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每个B细胞只分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。要想获得大量的单一抗体，必须用单个B细胞进行无性繁殖，即克隆。 * B淋巴细胞（浆细胞）与抗体的关系？ 　１．B淋巴细胞受抗原刺激后，可以产生抗体。 　２．动物体内的B淋巴细胞可以产生百万种以上的抗体，每种抗体对特定的抗原具有特异性免疫作用。 　３．每一个淋巴细胞只能产生一种抗体。 所以传统的抗体的生产方法及缺陷是什么？怎样解决这个问题？ * 抗体 1、抗原 动物体内 刺激 效应B 抗原 动物体内 刺激 效应B 抗体 抗原不纯 抗体不纯 筛选单一效应B细胞 不能增殖产生大量抗体 2、特异性差、纯度低； 产量低、反应不够灵敏 ㈠传统抗体的制备 * ㈡单克隆抗体 由单个B淋巴细胞经过无性繁殖（克隆），形成基因型相同的细胞群，这一细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体称为单克隆抗体。 特点：化学性质单一、特异性强、灵敏度高 * * 利用淋巴细胞产生抗体的功能 利用肿瘤细胞无限增殖的特性 利用细胞融合的技术将两种细胞融合获得具有淋巴细胞和肿瘤细胞特性的杂交瘤细胞 利用动物细胞培养技术大量培养杂交瘤细胞 如何筛选？ 融合方式？ * 设计方案： 一个B淋巴细胞－－只分泌一种特异性抗体 小鼠骨髓瘤细胞－－能无限增殖 杂种细胞 种类？ * ㈢单克隆抗体制备过程 * * 单克隆抗体制备过程 注射抗原 B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 细胞融合