(浙江选考)2019版高考生物一轮总复习 第九单元 生物技术实践 第30讲 微生物的利用学案.docVIP

第30讲　微生物的利用 考试标准 必考 加试 考试标准 必考 加试 1.大肠杆菌的培养和分离 √ 2.分离以尿素为氮源的微生物 √ 考点一　微生物的培养和分离 1．大肠杆菌 (1)特性：大肠杆菌是革兰氏阴性、兼性厌氧(代谢类型)的肠道杆菌，在肠道中一般对人无害，但若进入人的泌尿系统，就会对人体产生危害。 (2)用途：是基因工程技术中被广泛采用的工具。 2．细菌的培养和分离 (1)细菌的繁殖：以分裂的方式繁殖，分裂速度很快，约20 min分裂一次。 (2)培养的方法：需要将已有细菌的培养物转移到新的培养基中，一般用接种环(工具)转移带菌的培养物。 (3)细菌分离的方法与特点 分离方法 特点 划线分离法 操作简单 涂布分离法 操作复杂，单菌落更易分开 3.大肠杆菌的培养和分离实验 (1)实验内容：将大肠杆菌扩大培养和划线分离，即用LB液体培养基扩大培养大肠杆菌，培养后再在LB固体平面培养基上划线进行分离，随后培养基上就会形成一个个单独的菌落。 (2)实验步骤 培养基灭菌 倒平板 接种 划线分离 培养观察 50 mL LB液体培养基和50 mL LB固体培养基及培养皿高压蒸汽灭菌 将培养基分别倒至4个灭菌后的培养皿中，水平放置，使之形成平面 在装有液体培养基的三角瓶中接种大肠杆菌，培养12 h 用接种环在接种有大肠杆菌的三角瓶中蘸菌液一次，在固体培养基的平板上连续划线，盖好培养皿 培养皿倒置(盖在下面)，放在37 ℃恒温培养箱中培养12～24 h后，可看到划线的末端出现不连续的单个菌落 (3)大肠杆菌分离的用途：单菌落的分离是消除污染杂菌的通用方法，也是用于筛选高表达量菌株的最简便方法之一。 4．微生物两种常用的接种方法比较 比较 划线分离法 涂布分离法 工具 接种环 玻璃刮刀 原理 通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。在数次划线后培养，可以分离到由一个细菌细胞繁殖而来的肉眼可见的细胞群体，即菌落 将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细菌细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落 特点 方法简单，但不适宜计数 单菌落更易分开，但操作复杂些 目的 使培养基上形成由单个细菌细胞繁殖而来的子细胞群体——菌落 思考讨论 1．连线无菌技术的方法、类型及对象，并总结消毒与灭菌的区别。 消毒和灭菌的区别 项目 条件 结果 常用的方法 消毒 较为温和的物理或化学方法 仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物(不包括芽孢和孢子) 煮沸消毒法、巴氏消毒法、紫外线或化学药物消毒法 灭菌 强烈的理化因素 杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子 灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌 2.观察甲、乙、丙、丁四幅图，熟悉倒平板的操作流程，请填空： (1)请用文字和箭头写出正确的倒平板操作流程：丙→乙→甲→丁。 (2)甲、乙、丙中的灭菌方法是灼烧灭菌。 (3)丁中的操作需要等待平板冷却凝固才能进行。 3．下图中甲为划线分离法中最重要的环节，乙为操作的结果： (1)每一次划线后都要将接种环灼烧(　√　) (2)除第一次划线外，每一次划线的起点都是第一次划线的末端(　×　) 提示　平板划线时除第一次划线外，每一次划线的起点都是上一次划线的末端，而不是第一次划线的末端。 (3)说明乙图划线结束后，培养皿要倒置(盖在下面)在37 ℃恒温培养箱中培养的原因是什么？ 提示　平板冷凝后倒置培养，使培养基表面的水分更好地挥发；防止皿盖上的水珠落入培养基中造成污染。 4．如图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图，请思考： (1)获得图A效果和B效果的接种方法分别是什么？ 提示　获得效果A的接种方法为涂布分离法，获得效果B的接种方法为划线分离法。 (2)某同学在纯化土壤中的细菌时，发现培养基上的菌落连成了一片，最可能的原因是什么？应当怎样操作才可避免此种现象？ 提示　最可能的原因是菌液浓度过高或划线时在划下一区域前未将接种环灼烧灭菌；采取的措施是增大稀释倍数或每次划新区域前先将接种环灼烧灭菌。 1．(2017·杭州一模)据报道，一些企业生产的速冻食品中检出金黄色葡萄球菌超标，加上熟卤制品的大肠杆菌超标，“细菌门”事件引起公众普遍关注。金黄色葡萄球菌能分解卵黄中的卵磷脂，在含卵黄的固体培养基上形成的菌落周围会出现特有的乳白色的乳浊环。请回答下列问题： (1)某生物兴趣小组欲检测某果汁类食品中是否含有金黄色葡萄球菌以及该菌的含量。 ①配制培养基：称取适量的牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂等，加入蒸馏水，搅拌加热至完全溶解后____________，分装到锥形瓶