微生物感染的实验室检查与防治原则.ppt

第一节 微生物感染的实验室检查 一、标本的采集与处理原则 （一）病原体及其成分检测标本的采集 1.采集时间：早期、急性期、症状典型或用药前 2.取材部位：根据感染特点选择最佳部位 3.妥善处理：局部生理盐水冲洗、抗生素除菌 4.尽快送检：床边接种、冷藏运送、甘油缓冲盐水保存 5.详细登记：标本名称、采集部位、病程等说明 （二）特异性抗体检测标本的采集 发病初期及急性期各采取一份血清，4倍以上有诊断意义 二、病原菌感染的检查 （一）检测病原菌 1.直接涂片镜检（形态学检查）—初步诊断 痰培养 抗酸染色阳性 形态细长有分枝—结核分枝杆菌 2.分离培养—精确诊断 获得纯培养后检验生物学特性、药物敏感性等 3.生化反应—鉴别诊断 可对形态染色性相近的细菌进行鉴别 4.血清学试验 用已知的抗体测未知的抗原 5.药物敏感试验 指导临床用药、及时治疗和控制耐药菌感染 （二）检测病原菌结构成分 ——快速诊断 1.检测抗原 —原理：用已知的特异性抗体检测未知抗原 —优点：快速、敏感，可检测微量抗原 —方法：免疫荧光技术、酶免疫技术等 2.检测核酸 —原理：检测病原菌的特异基因序列存在与否， 作为病原菌的基因诊断 —优点：更特异、敏感 —方法：核酸杂交、PCR、基因芯片 病毒感染的检查 检测内容 查病毒 查特异性抗体 病毒颗粒 病毒抗原 病毒核酸 病毒酶类：如逆转录酶 电镜直接观察 光镜检查包涵体 分离培养 三、病毒感染的检查 （一）病原体的检测 1.镜检：镜下检测病毒的形态结构，能鉴定病毒 2.分离培养与鉴定 （1）细胞培养：原代细胞、二倍体细胞、传代细胞 缺点：需时长、要求严格无菌操作 （2）鸡胚接种：对多种病毒敏感、价格低 （3）动物接种：少用，个别病毒需要 2、病毒的分离与鉴定一般程序 标本 无菌处理 动物接种 鸡胚培养 细胞培养 指标阳性 指标阴性 病毒鉴定 盲传2～3代 指标阴性 病毒阴性 2.病毒的分离培养 （1）细胞培养 单层细胞培养（monolayer cell culture） 分类 悬浮细胞培养（suspended cell culture） 原代细胞（primary cell） 细胞种类 二倍体细胞（diploid cell） 传代细胞系（continuous cell line） 病毒的细胞培养 细胞培养瓶 单层细胞 原代和次代细胞培养 组织 组织块 分散的单个细胞 单层细胞 剪碎 培养基 (原代细胞) 单层细胞 (次代细胞) 传代培养 蛋白酶 特点：①对多种病毒敏感 ②生长能力有限, 获取成本高 ③可携带潜伏病毒 原代和次代细胞培养 二倍体细胞培养 体外分裂50～100代仍保持二倍体染色体数目，可用于病毒分离和疫苗生产。 特点：①对多种病毒敏感 ②不带异种蛋白(人源性) ③不带病毒，无致瘤潜能 ④可传50代左右 传代细胞培养 特点：①对多种病毒敏感性高 ②繁殖能力高，传代时间长 ③有致癌危险，不能用于疫苗生产 （2）鸡胚培养 采用孵化9～14天的鸡胚 绒毛尿囊膜（allantocherion） 痘苗病毒、人类疱疹病毒 尿囊腔（allantoic cavity） 接种部位 流感病毒、腮腺炎病毒 羊膜腔（amniotic cavity） 流感病毒的初次分离 卵黄囊（yolk sac） 嗜神经病毒 鸡胚培养 优点：易管理，不带微生物，成本较低 缺点：操作程序复杂 （3）动物接种 应用：尚无敏感细胞的病毒培养 动物：兔、鼠、黑猩猩、猴等 优点：结果易观察，可建立动物模型 缺点：有饲养条件要求，费用高，动物 体内常带有潜伏病毒