纯种发酵淡豆豉对小鼠微生态调节作用研究.docVIP

纯种发酵淡豆豉对小鼠微生态调节作用研究 　　【摘 要】目的：观察纯种发酵淡豆豉对小鼠肠道微生态的影响。方法：盐酸林可霉素灌胃建立小鼠肠道菌群失调模型，然后用纯种发酵淡豆豉进行治疗，同时设立正常对照组、自然发酵淡豆豉治疗组、阳性对照组（丽珠肠乐治疗组）和模型对照组，比较其治疗效果。结果：林可霉素灌胃3d后，小鼠肠道菌群失调。持续淡豆豉7d治疗后，小鼠肠道双歧杆菌和乳酸杆菌数量明显上升。结论：应用林可霉素可以成功建立肠道微生态失调动物模型；纯种发酵淡豆豉具有扶植肠道正常菌群生长，调整菌群失调的作用，且作用明显优于自然发酵淡豆豉。 　　【关键词】淡豆豉；纯种发酵；微生态；肠道菌群 　　【中图分类号】R284 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484（2012）13-0007-01 　　肠道菌群是构筑肠道粘膜屏障的主要成分，为机体抵御病原菌的侵袭提供了强大的生物屏障。然而在目前大量应用广谱抗生素、外科大手术等条件下，肠道正常菌群遭到严重破坏，使肠道菌群成了细菌耐药性产生和传播的疫源地。近年来研究发现，一些中药具有扶植正常菌群生长，改善菌群失调的作用，是良好的微生态调节剂[1]。淡豆豉是一种发酵性中药，是由于大豆经微生物发酵后改变其药物原有性能，产生新的治疗作用。现代研究表明，常服豆豉有助于消化、提高抗病能力、减缓衰老、消除疾劳等多种作用，但具体机制和活性成分不清楚。目前市售中药淡豆豉均为自然发酵淡豆豉，存在着杂菌污染、质量无法有效监控等缺陷，我们前期对淡豆豉进行了纯种发酵的研究，发现纯种发酵淡豆豉生物活性成分的含量大大高于自然发酵淡豆豉[2]。本文探讨纯种发酵淡豆豉对肠道菌群的调整作用。 　　1 实验材料 　　1.1 实验动物 昆明种小鼠，70只，雌雄各半，体重20±2g，由贵阳医学院实验动物中心提供。 　　1.2 药物 盐酸林可霉素（300g/L），上海旭东海普药业有限公司；丽珠肠乐，珠海丽珠制药厂，用生理盐水稀释成2×108个活菌/ml；黄豆，市售。 　　1.3 培养基 EMB（肠杆菌选择性培养基）；EC（肠球菌选择性培养基）；LBS（乳酸杆菌选择性培养基）；BS（双歧杆菌选择性培养基），购??青岛海博生物技术有限公司。 　　1.4 仪器 II级生物安全柜，厌氧培养箱，电子天平等。 　　2 实验方法 　　2.1 纯种发酵淡豆豉制备 市售大豆用饮用水室温浸泡过夜，滤干水后0.1Mpa高压蒸煮30min，用实验室保存的淡豆豉发酵菌株培养液按2%接种量接种在高压过的大豆中，摇匀后32℃恒温培养7天。发酵完成后的淡豆豉样品分别置于60℃干燥、粉碎、过60目筛，使用时配成1g/ml的混悬液。 　　2.2动物分组及给药 按文献方法[3]，昆明种小鼠随机抽取20只作为正常对照组，其余50只随机分为模型对照组、纯种发酵淡豆豉治疗组、自然发酵淡豆豉治疗组和丽珠肠乐治疗组，其中模型对照组20只，其余各组为10只，均用盐酸林可霉素灌胃，每次0.3ml，每天2次，连续3天，正常对照组以等量生理盐水灌胃。第4天，处死正常组小鼠和模型组小鼠各10只，进行肠道菌群检测，以判断模型是否构建成功。各组小鼠模型制备成功后，分别以药物灌胃，每次0.5ml，每天2次，正常对照组和模型对照组则灌以等量生理盐水。连续灌胃7d后处死，取标本进行各种指标检测。 　　2.3 肠道菌群检测 无菌条件下取盲肠内容物0.05g置于装有玻璃珠的无菌小瓶内，加0.45ml生理盐水，于振荡器上振荡20min，使盲肠内容物均质化。随后用生理盐水进行10倍系列稀释至10-9倍。选择稀释度：肠杆菌（10-3、10-4、10-5）、肠球菌（10-4、10-5、10-6）、乳酸杆菌（10-6、10-7、10-8）、双歧杆菌（10-7、10-8、10-9）， 吸取每个稀释度的标本10μl滴于培养基上，EMB、EC、LBS、BS培养基各滴3滴，放置10min后，将BS及LBS放于厌氧培养箱中，厌氧培养48～72小时，将EC及EMB置于温箱中，需氧培养24小时。活菌计数：计算活菌数（CFU）/g标本，选择菌落中适宜的稀释度，算出同一稀释度平均菌落数（X）。 　　2.4 统计学处理 结果用均数±标准差（x±s）表示，组间比较采用SPSS10.0统计软件进行方差分析。 　　3 实验结果 　　3.1 经过林可霉素灌胃3d后，模型组小鼠与正常组比较，肠道菌群数量发生明显改变，其中双歧杆菌和乳酸杆菌数量明显下降（P?0.01，P?0.05），而肠杆菌和肠球菌显著升高（P?0.05），说明模型组小鼠经过林可霉素作用后出现菌群失调，结果见表1。 　　3.2 菌群失调小鼠经过淡豆豉和丽珠肠乐治疗后，肠道菌群失调症状得到缓解，各治疗组双歧杆菌、乳酸杆菌数量明显上升，肠球菌、肠杆菌数量明显下降，与模型对照组比较，差