表面活性剂在枇杷叶总三萜酸提取工艺中应用.docVIP

表面活性剂在枇杷叶总三萜酸提取工艺中应用 　　摘 要：研究表面活性剂协同超声辅助提取枇杷叶中的总三萜酸。以水为提取溶剂，考察表面活性剂的种类、表面活性剂的质量浓度、料液比、提取温度及时间对三萜酸得率的影响，再通过正交实验优化提取工艺。结果表明表面活性剂协同超声提取枇杷叶总三萜酸的最佳工艺为吐温60的质量浓度为1%，料液比1：25，温度为50℃，提取时间为30min，总三萜酸的得率为12.17%。 　　关键词：表面活性剂；超声辅助提取；枇杷叶；三萜酸 　　枇杷叶为蔷薇科Rosaceae 植物枇杷Eriobotrya japonica（Thunb.）Lindl.的干燥叶，主产于广东、广西、江苏等地，具有清肺止咳、降逆止呕等功效[1]。据报道枇杷叶的主要化学成分有糖苷类、三萜类、挥发油类及黄酮类等[2]。其中三萜类成分含量丰富，陈欢等[3]利用色谱分离技术从枇杷叶的乙醇提取物中分离得到了乌索酸、齐墩果酸、科罗索酸及其系列衍生物。现代药理研究表明乌索酸和齐墩果酸在保肝、降糖、抗炎及抗病毒方面具有较强的药理活性[4]。由于上述化合物结构相似且多具有酸性，故称为三萜酸。三萜酸在水中的溶解度非常低，故提取三萜酸的溶剂常选用乙醇。例如李开泉等[5]采用90%的乙醇为溶剂从枇杷叶药渣中提取三萜酸，蒙瑞波等[6]采用70%的乙醇回流提取三萜酸等。本实验考虑三萜酸具有酸性可溶于碱液中，采用碱水为溶剂、表面活性剂协同超声提取法[7]优选枇杷叶中总三萜酸的提取工艺，以期获得一种得率高、安全又节能的提取三萜酸的新工艺。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料与仪器 　　枇杷叶，宜春市老百姓大药房；吐温20、吐温60、吐温80、司盘60、司盘80，临沂优尼特生物科技有限公司；乌索酸标准品（纯度：99.82%），宜春学院研制；其它化学试剂均为分析纯；实验用水为蒸馏水。 　　T6新世纪紫外可见分光光度计，北京普析通用有限责任公司；KQ-250E超声波清洗机，昆山舒美；AB204-S型梅特勒电子天平，北京梅特勒-托利多有限公司。 　　1.2 实验方法 　　1.2.1枇杷叶总三萜酸的提取工艺 　　枇杷叶洗净晒干，粉碎过40目筛。准确称取枇杷叶干粉10.0g，放入三角锥瓶中，加入适量的表面活性剂溶液，用氢氧化钙调pH8～9[8]，混合均匀，以设定条件进行超声处理；过滤，滤液用盐酸调pH3～4，至沉淀析出完全为止；过滤，沉淀用水洗涤2～3次，置105℃的烘箱内干燥至恒重，得总粗三萜酸产品。 　　1.2.2总三萜酸的含量测定[9]（乌索酸比色法） 　　1.2.2.1乌索酸对照品溶液的配制 　　精密称量经105℃干燥至恒重的乌索酸标准品0.0502g，置100mL的容量瓶中，加乙醇溶解并稀释至刻度。摇匀即得0.502mg/mL的乌索酸对照品溶液。 　　1.2.2.2标准曲线的建立 　　以乌索酸为对照品，分别取对照品溶液0mL、1mL、2mL、3mL、4mL、5mL至25mL的容量瓶中，用乙醇稀释至刻度，采用紫外可见分光光度法在546nm处分别测定不同质量浓度ρ（mg/mL）的乌索酸的吸光度。得出标准曲线方程为A=7.19ρ- 0.0012，R2=0.9984。说明三萜酸的质量浓度在0.02 mg/mL～0.10mg/mL范围内线性关系良好。 　　1.2.2.3供试品溶液的配制 　　取上述1.2.1项下得到的粗三萜酸产品适量，用乙醇溶解后过滤，滤液至100mL容量瓶中定容后，取1mL并稀释一定的倍数使其浓度在线性范围内。该溶液即为供试品溶液。 　　1.2.2.4总三萜酸得率的计算 　　以供试品溶液测得的吸光度，代入乌索酸标准曲线方程计算出供试品中三萜酸的质量浓度。结合供试品溶液的配制方法可知总三萜酸的得率计算公式为： 　　得率=ρnm1 /10mm2 ×100% 　　式中ρ为供试品溶液中三萜酸的质量浓度（mg/mL）；n为稀释倍数；m为枇杷叶干粉的质量（g），m1为总粗三萜酸的质量（g），m2为配制供试品溶液项下取得粗三萜酸的质量（g）。 　　1.2.3单因素实验 　　按1.2.1项下提取工艺分别考察表面活性剂的种类和表面活性剂的质量浓度对三萜酸得率的影响。 　　1.2.4 正交实验 　　在单因素实验结果的基础上，对吐温60的质量浓度、料液比、超声温度和提取时间这四个因素分别设置三水平值。其四因素三水平表见表1。再按1.2.1项下提取工艺根据L9（34）正交设计条件分别进行实验。 　　■ 　　1.2.5 验证实验 　　对正交实验得出的最佳提取工艺进行验证，重复操作3次，取平均值。 　　2 结果与讨论 　　2.1 单因素实验结果 　　2.1.1不同的表面活性剂对得率的影响结果 见表2。 　　表2 表面活性剂的种类