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多重耐药鲍曼不动杆菌相关耐药基因研究 　　摘要：目的：研究临床分离的多重耐药鲍曼不动杆菌相关耐药基因及整合酶的存在情况。方法：采用美国MicroScan96鉴定药敏分析仪测定菌株及其耐药性。采用聚合酶链反应（PCR）方法检测β-内酰胺酶基因型及整合酶基因。结果：33株鲍曼不动杆菌对阿米卡星耐药率20.3%，左氧氟沙星和环丙沙星耐药率分别30.3%和46.3%，对临床常用抗菌药物均高达70.0%以上。检出β-内酰胺酶基因28株（84.8%），OXA-23阳性22株（66.7%），OXA-51阳性18株（54.5%），AMPC酶阳性18株（54.5%），TEM阳性5株（15.1%），SHV阳性4株（12.1%），PER阳性3株（0.9%），14株（50%）同时携带3种以上基因。整合酶Intl 1阳性26株（78.8%），Intl 2阳性5株（15.1%），未检出IMP、VIM、CTX-M-9，DHA、OXA-24、OXA-58，Intl 3。结论：本地区多重耐药鲍曼不动杆菌β-内酰胺酶基因携带率高，整合酶Intl 1携带率高。 　　关键词：鲍曼不动杆菌 多重耐药 耐药基因 整合子 　　Doi：10.3969/j.issn.1671-8801.2014.02.006 　　【中图分类号】R4 【文献标识码】A 【文章编号】1671-8801（2014）02-0006-02 　　鲍曼不动杆菌（ABA）是医院感染常见的病原菌之一。由于抗菌药物的大量使用，使该菌多重耐药甚至泛耐药的菌株不断增加[1]，其引起的感染治疗不断面临诸多挑战。为研究本地区多重耐药ABA菌株对抗菌药物的耐药机制，我们采用聚合酶链反应（PCR）方法对临床分离的33株多重耐药ABA菌株检测相关β-内酰胺酶基因型及整合酶基因。 　　1 材料和方法 　　1.1 菌株来源。33株菌从2008年9月-2012年5月住院患者临床标本中分离收集，其中痰液29株，中段尿2株和伤口分泌物2株，科室分布主要来自神经外科ICU和中心ICU。质控菌株为ATCC25922大肠埃希菌和ATCC27853铜绿假单胞菌。 　　1.2 仪器与试剂。鉴定药敏分析仪为美国MicroScan96型；电泳仪；PCR扩增仪；UVI凝胶成像仪；Premix Tag酶体系及DNA Marker DL2000引物。 　　1.3 药敏试验。采用微量肉汤稀释法。采用美国MicroScan96全自动微生物鉴定药敏分析仪，阴性复合板NC50测定13种抗菌药物的敏感性，敏感性判断依据为2010年美国临床实验室标准化研究所（CLSI）标准。 　　1.4 模板的制备。采用煮沸法。挑取已分纯的菌落至内含0.5ml无菌蒸馏水的离心管内，沸水煮10min后立即放冰块上冷却，然后离心（4℃1200r/min）5分钟，无菌吸取上清液即为DNA模板液，-20℃冰箱保存备用。 　　1.5 耐药基因检测。均采用PCR法。15种耐药基因PCR引物序列见表1。靶基因PCR扩增体系：Premix Tag酶体系25ul，上下游引物各10pmol，模板DNA 4ul，用ddH2O补足至50ul。热循环参数均为：94℃预变性45s，然后94℃45s→55℃45s→72℃1min，循环35周期，最后一个72℃延长至10min。产物经2%琼脂糖凝胶电泳，出现目的条带判定为阳性。 　　表1 相关耐药基因PCR引物序列 　　2 结果 　　2.1 药敏试验结果。33株鲍曼不动杆菌除对阿米卡星耐药率最低20.3%，左氧氟沙星和环丙沙星耐药率分别为30.3%和46.3%外，对其他临床常用11种抗菌药物均高达70.0%以上。对碳青霉烯类药物亚胺培南及美罗培南耐药率也分别高达80.0%和76.5%。结果见表2。 　　表2 33株鲍曼不动杆菌对13种抗菌药物的耐药情况（%） 　　2.2 基因PCR检测结果。检出β-内酰胺酶基因28株，检出率为84.8%。OXA-23样阳性22株（66.7%），OXA-51样阳性18株（54.5%），AMPC酶阳性18株（54.5%），TEM阳性5株（16.6%），SHV阳性4株13.3%，PER阳性3株（10%）。同时携带3种或以上耐药基因有14株（50%）。整合酶Intl 1阳性26株（78.8%），Intl 2阳性5株（15.1%），未检出VIM、IMP、OXA-24、OXA-58、DHA、CTX-M-9组和Intl 3。 　　3 讨论 　　多重耐药鲍曼不动杆菌已成为医院感染重要病原菌之一，可引起医院内呼吸道感染，泌尿系感染，软组织感染，菌血症等，给临床治疗带来极大困难[2]。本组研究显示，临床标本来源包括痰液、伤口分泌物和中段尿。33例感染多重耐药鲍曼不动杆菌的患者中28例来源于痰液，并且这些患者均有不