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西南大学 动物专业英语作业 基于龙虾外壳的染色机理，测定β-虾青蛋白在3.2 ?的分辨率 (注：CR 是虾青蛋白的缩写形式，AXT是虾青素的缩写形式) 在蛋白质大分子物质的外缘镶上类胡萝卜素中的AXT，则构成了龙虾外壳的CR。这种CR是龙虾壳能被染为蓝色的原因。CR的结构是由于在溶液中生色基团转变而成，且很长难以测量。无限稀释的AXT会从橙红色，即龙虾煮过后的颜色变为蓝色，并以结合蛋白的形式存在于龙虾体内。提取的CR经过脱水后变成红色，在水化又变成蓝色，这一现象引起我的好奇。进来，X-射线的使用和氙的衍生物产生的CR的亚基A的序列的三维结构进一步证实了CR是从属于脂钙蛋白类的。这一研究发现为β-CR的结晶组成，即包括2个AXT分子结合A1，A2亚基的集合体，提供了分子变换的模型。我们已经确定了A3分子的结构，即de novo。通过使用AXT和生色基团的转换是龙虾壳染色的机理，使其复杂的结构有了进展。蓝色或紫色的AXT普遍存在于无脊椎的海生动物体内，尤其是甲壳纲。β-CR的三维结构已经证实了蛋白质的连接点和结构变化所需AXT控制的原理。 在龙虾的CR中，AXT的存在引起生色基团吸收的转变，在50年前就引起了科学家的研究兴趣。在无限稀释的AXT中，α和βCR顶峰在波长为472nm在己烷溶液中或者在多烯中分别在580nm和632nm处。化学研究包括基态结构和化学综合的类胡萝卜素在生色基团从基态到激发态的所需能量的减少的作用的必须化学物质。酮类在4和4′号位并连接多烯链。甲基在C20和C20′`号位的中心位置，仅有反式的同分异构分子能结合蛋白质。在总体形态和结构上是可以接受少许变化的。β-CR的可见光谱有利于生色基团载色体的螺旋曲折。极速的激发电子表明两个AXT分子是最近的。CR在拉曼光谱下的AXT的最低速电场中的极化。这些光谱与大量蛋白质引起多烯链的变形不一致，尽管在解释光谱时几何形变是很小的。不可思议的13 C的核磁共振的偏转角度和Stark的光谱学在CR中极化对称的AXT中存在生色基团两级不对称现象的解释。一个质子化模型在观察可见光谱和核磁共振后发现其包括在AXT分子的末端接有C-4酮类，在极化过程中有水分子的参与，已经被提出。 有一种β-CR的假定模型，在氨基酸序列的基础上，在非极性环境中，在每个假定的脂钙蛋白亚基的AXT得末端有一个环状。这种模型与之前所提及到的再4和4`号位的酮基由于质子化作用的极化现象相矛盾。过去对染色蛋白的分析认为它总的包括16个AXT分子，这个聚合物由8个40-KDa的二聚物连接有2个AXT分子。这些β-CR是α-CR不可逆的产物，它们这成了2种大约是20-KDa的原体（脱辅机蛋白），Ⅰ类（CRTC）和Ⅱ类(CRTA)与类胡萝卜素结合。这种脱辅机蛋白是根据电泳淌度和其化学性质来命名的：CRTC是由脱辅基CRsC1,C2和A1组成，而CRTA由A2和A3组成。二聚物的结构对A1和A3蛋白质与AXT分子结合有限制作用。对CR最开始的兴趣是由在CR中AXT的光谱转移与在杆状的视紫醇的可见色素中的视黄醇的相似性而激发的。视网膜结合蛋白是由7个螺旋反式的细胞蛋白，视紫质，生色基团组成。光谱转移的原理主要是极化。视网膜以共价键连接，通过质子化作用，以及光谱转移的大小主要是由带电链控制。相反，在类胡萝卜素中的CR是由非共价键连接的。在复合物中的AXT由基态到激发态的能量差，在视紫醇中在0.73。它在与能量有关的复合物中有同样的作用。其它的脂钙蛋白的一个结构单元的环状结构与配合基连接，比如：血浆视网膜结合蛋白，胆汁结合蛋白，在腊梅中胆绿素的大量折叠连接。相反, β-CR所呈现出的晶体结构显露出2个类胡萝卜素的结合点，为了跨越2个结构单元的接触面。因此，光谱转移的三维结构的在异质二聚体的基础上构造的。 材料及方法 提纯和染色：α-CR是在极佳的处于基态的龙虾壳中提取的，通过电子交换和色谱分析法莱达到净化的目的的。这种蛋白质在0.3mM的Tris HCL,PH8.8中经过多次的渗析分离得到β-CR。重要的β-CR[B(A1/A3)]从二聚物中被分离出来是用快速流动的蛋白质液体用色谱分析法得到。这步操作包括从缓冲液A(10Mm Tris? HCL,PH7)和缓冲液B(10Mm Tris? HCL∕0.2M KCL,PH7)以10ml∕min的速度来制备一个有线性梯度的MonoQ HR10∕10圆柱。在含有少量油状物的环境中晶体逐渐形成。大量的结晶实验使用蒸汽漫散技术都失败了.最佳的结晶在4oC,滴加2ul~4ul在蛋白质含量为10mg/ml在10mM Tris?HCL缓冲液（PH8.0）和1.25M(NaH2/K2H)PO4在PH7在0.05 M Hepes 缓冲液在PH7.5的油中。这步操作需要几周的时间。晶