动物克隆及其研究进展摘要(华南师大版).docVIP

动物克隆及其研究进展 克隆(clone)是指通过无性繁殖的方法从一个细胞或个体产生一组遗传上完全相同的细胞或个体。在自然界中，植物和低等动物的克隆较常见，如植物的插枝、嫁接和低等动物(如昆虫)的无性繁殖都属于克隆；甚至在高等动物上也出现克隆现象，如一种无齿的哺乳动物——犰狳在自然情况下每次出生8个遗传上完全相同的后代，这些个体属一个克隆系；高等哺乳动物的同卵双胎也属于动物的克隆，但自然发生的频率较低，故高等动物的克隆主要是通过人为的方法产生。 广义讲动物的克隆技术包括卵裂球分离、胚胎分割和细胞核移植 (nuclear transfer)。用卵裂球分离和胚胎分割技术只能从一个胚胎获得有限数量的克隆后代，目前通过这两种技术从一个胚胎得到的后代数不超过4个，在生产实践和理论研究上意义有限；而以胚胎细胞和体细胞作供体进行的核移植可以从一个胚胎和一小块组织得到理论上无限个后代，因此动物的克隆主要指细胞核移植技术。 核移植：胚胎细胞核移植 胚胎干细胞核移植 体细胞核移植 一、胚胎细胞核移植技术简介 1. 受体卵母细胞的准备 2. 供体细胞的准备 3. 卵母细胞的去核与供体细胞注射 4. 重组胚的融合 5. 重组胚的激活 6. 重组胚的培养与胚胎移植 1. 受体卵母细胞的准备： 卵母细胞的来源主要有三条途径： 超数排卵：人为注射外源促性腺激素，促使卵巢排出更多卵母细胞，通过手术从超排动物的输卵管内回收刚排出的成熟卵母细胞； 活体采卵：借助超声波探测仪、腹腔内窥镜等观察体内卵泡发育状态，然后从卵巢上直接吸取2～6mm的卵泡卵母细胞，体外培养使之成熟； 屠宰后母畜卵巢上采卵（体外成熟）：从屠宰场回收母畜卵巢，从卵巢上采集一定直径卵泡中未成熟的卵母细胞，经体外培养使之成熟。 5. 重组胚的激活： 电激活：电激活是目前最常用的激活方法之一，其原理是细胞在短暂高压直流电脉冲作用下细胞膜上形成瞬时微孔，细胞外的Ca2+通过微孔进入细胞内，引起细胞内Ca2+浓度的升高，从而引起卵母细胞的激活。 乙醇激活：乙醇是发现较早的一种能有效激活哺乳动物卵母细胞的化学物质，它通过启动细胞膜上的三磷酸肌醇（IP3）的形成，进而诱发细胞内钙库（内质网和线粒体）释放Ca2+，使胞内Ca2+浓度升高引起卵子激活。 钙离子和钙离子载体激活：直接向胞内注射Ca2+或用钙离子载体处理哺乳动物的卵母细胞，可以使细胞内Ca2+升高，引起卵母细胞的激活和原核的形成。A23187是一种钙离子载体，可增加Ca2+的跨膜转运，使细胞内Ca2+浓度升高而引起卵母细胞的激活。 离子霉素(ionomycin)激活：离子霉素是近年来发现的又一个钙离子载体，它能有效地动员细胞的Ca2+释放，并依次触发后期Ca2+的内流，引起细胞内的Ca2+升高和卵母细胞的激活。单独使用离子霉素虽能激活卵母细胞，但激活后的卵母细胞排出第二极体后染色体浓缩，很少形成二倍体的原核，因此在用离子霉素进行重组胚激活时，也需要与细胞松驰素B、6-DMAP、CHX联合使用。 Sr2+ 激活：Sr2+与Ca2+是同族的二价阳离子，Sr2+对卵母细胞的激活作用可能是通过细胞膜上的Ca2+通道进入细胞内，并进入钙库，置换出内源Ca2+，释放入胞质中，使胞内游离Ca2+增加。Sr2+可以引发一个较长时间的Ca2+波动过程，可能是在细胞内Sr2+不被消耗，但同时又可模拟Ca2+而诱发内源性Ca2+的释放，其诱发的Ca2+波动与正常受精过程中Ca2+的波动极为相似。 二、胚胎干细胞核移植研究进展 胚胎干细胞 (embryonic stem cell，ES或EK) 是早期胚胎经离体抑制分化培养而筛选出来的一类全能性细胞，这种细胞具有正常的二倍体核型，它既可以在体外特定条件下进行无限增殖而不发生分化，又可以在特定条件下分化为包括生殖系在内的各种细胞组织。到目前为止，只得到了小鼠和人的ES细胞，其它动物仅得到ES样细胞。 PGCs (primordial germ cells)：原始生殖细胞，来源于体细胞，功能上类似干细胞，将来分化为生殖细胞的一类细胞。 ICM细胞 (inner cell mass) 及其衍生细胞：功能上类似ES细胞，最初的ES细胞由ICM细胞分离而来。由于ICM来源的细胞系 (cell line derived from ICM, CLDI) 在功能和来源上与ES细胞相同，故将CLDI与ES细胞放入一类细胞。 三、体细胞核移植研究进展 全球首例体细胞克隆羊——Dolly （1997，英国） 四、体细胞核移植的应用前景 体细胞克隆在基础研究中的应用 细胞分化与脱分化的本质 核质相互