基于GSN稳转肝癌细胞转录组新基因研究.docVIP

基于GSN稳转肝癌细胞转录组新基因研究 　　摘要：目的 凝溶胶蛋白（Gelsolin， GSN）是凝溶胶蛋白超家族的成员之一，被发现对肿瘤转移具有促进作用。本研究旨在构建GSN双标签慢病毒载体，发现GSN过表达肝癌SMMC7721细胞转录组新基因。方法 PCR扩增GSN cds全长片段，接入带FLAG-HA双重标签的PCDH-CMV-MCS-EFl-Puro慢病毒载体中，经测序鉴定的重组质粒，病毒包装后转染人肝癌细胞SMMC7721，嘌呤霉素筛选稳定表达细胞系；In-Cell Western（ICW）检测GSN在SMMC7721肝癌细胞中的表达，Ion proton测序系统对转染及未转染的肝癌细胞进行mRNA测序。结果 测序表明重组质粒DNA序列与NCBI检索到的GSN编码序列一致；ICW检测到稳定转染细胞中GSN蛋白的表达为未处理细胞的2.02倍（P4。结论 基于GSN稳定表达的SMMC7721肝癌细胞株所发现的转录新基因，为研究GSN在肝癌中的作用机制开拓新方向。 　　关键词：GSN；SMMC7721；慢病毒载体；转录组；新基因 　　GSN是??个钙离子和二磷酸磷脂酰肌醇依赖性肌动调节蛋白，主要有细胞质型和分泌型两个亚型，在细胞骨架重塑、免疫反应及磷酸肌醇信号通路中发挥重要作用[1]。研究表明GSN与引发细胞凋亡蛋白酶级联反应蛋白酶之一半胱天冬酶-3（CPP-32）作用