早期自然流产患者蜕膜和绒毛组织中VEGFmRNA表达.docVIP

早期自然流产患者蜕膜和绒毛组织中VEGFmRNA表达 　　【摘 要】目的：通过研究血管内皮生长因子（VEGF）在正常早期妊娠和早期自然流产蜕膜及其绒毛组织中的表达，初步探讨VEGF与早期自然流产的关系，为早期自然流产的发病机制提供理论依据；方法：设30例早期自然流产患者为研究组，设30例正常妊娠分娩为对照组，采用半定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测上述两组蜕膜及绒毛组织中VEGFmRNA的表达；结果：1.在蜕膜组织中，早期自然流产组VEGFmRNA的表达量高于人工流产组，但差异无统计学意义（P?0.05）。2.在绒毛组织中，早期自然流产组VEGFmRNA的表达量高于人工流产组，差异有统计学意义（P 　　【关键词】血管内皮生长因子；早期自然流产；蜕膜；绒毛 　　【中图分类号】R714 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484（2013）10-0514-02 　　本实验采用半定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术，检测蜕膜及绒毛组织中VEGFmRNA表达量，并与正常妊娠分娩组进行比较，探讨母胎界面局部细胞因子在流产发病中的机理，为防治流产，提高人类辅助生育技术的成功率提供依据。 　　1 材料 　　1.1 研究对象：病例组（自然流产组）：取自2012年7月―2012年9月北京市门头沟区医院妇产科，为既往月经规律，停经8-12周，B超证实无胎心搏动，未经药物保胎治疗的早孕患者，共30例。平均年龄28.31±1.52岁；平均孕周（7-11周）为8.16±1.58周。对照组（人工流产组）：B超证实胎儿有胎心搏动且发育正常，既往无不良妊娠史，共30例。平均年龄27.49±1.68岁，平均孕周（7-11周）为8.25±1.28周。两组平均年龄及平均孕周无差异。 　　1.2 标本收集：自然流产组，孕囊自行排出者取其绒毛组织并在常规消毒下刮取蜕膜组织，孕囊未自行排出者行常规负压吸引取绒毛及蜕膜组织；人工流产组，在常规负压吸引下取其绒毛及蜕膜组织。 　　2 方法 　　RNA样品经逆转录反应，进行PCR扩增。PCR反应条件： 94℃变性30s；退火58℃1min；延伸72℃1min；共30个循环。然后将PCR产物上样于1.5%琼脂糖凝胶在100V电压下电泳25min。电泳带观察：电泳完毕后，在透射紫外灯下观察电泳带，经自动凝胶成像系统进行凝胶成像，并用AlphaImager 2200 软件对VEGF和GAPDH电泳条带进行灰度分析，VEGF和GAPDH逆转录产物灰度比值即为VEGFmRNA的相对表达量。 　　3 统计方法 　　数据以 ±S表示，两组间VEGFmRNA相对表达量的比较采用两样本t检验分析。 　　4 结果 　　本研究所用的VEGF引物序列为四种VEGFmRNA共有，RT-PCR扩增产物预期片段长度分别为：VEGF121 452bp、VEGF165 548bp 、VEGF189 656bp 、VEGF206 707bp。在所有标本中，都仅检测到452bp的VEGF121和548bp的VEGF165，以及178bp的内参基因GAPDH的表达（图1）。自然流产和人工流产蜕膜和绒毛组织中VEGFmRNA相对表达量见表1和表2。 　　5 讨论 　　妊娠是一个复杂的生理过程，正常妊娠需要子宫内膜具有完善的血管网络使母胎之间能够正常的进行物质交换[1]。VEGF是一类具有高度特异性的促血管内皮细胞分裂原， 与血管形成关系密切。目前已知其定位于6号染色体短臂1区2带上（6p12），基因全长14kb， 有8个外显子和7个内含子[2、3]。 　　Shirashi等证实，整个生理妊娠过程中，人胎盘合体滋养细胞和绒毛外滋养细胞（间质滋养细胞）均有VEGF的表达，随着妊娠进展，VEGF表达增加，到妊娠16周左右达到高峰，之后表达逐渐下降[4]。这与胎盘生长发育时间相吻合，说明在胎盘生长发育过程中VEGF具有重要的生理调节作用。Vuorela等[5]用免疫组化的方法分析有习惯性流产和稽留流产病人与正常早期终止妊娠的孕妇相比，胎盘滋养细胞和蜕膜VEGF表达降低。 　　有关实验证明，在缺氧环境下，无论是体内还是体外培养的绒毛组织，48小时后其VEGFmRNA表达量增加10倍，VEGF蛋白表达增加10.2倍[6]。Sharkey等[7]研究也发现，低氧可诱导子宫内膜上皮和基质VEGF分泌增高，而雌、孕激素并不能改变这种增高，证明低氧可作为一种独立的因素调节VEGF分泌。 　　为探讨VEGF与早期自然流产的关系，本研究参考国内外相关文献，采用可扩增出VEGF121、VEGF165、VEGF189、VEGF206的引物，对早期自然流产蜕膜和绒毛内VEGF的表达情况进行研究。本实验用RT-PCR方法在自然流产和人工