针刺“足三里”穴对家兔末梢血白细胞..pptVIP

针刺“足三里”穴对家兔末梢血白细胞数影响的时间-效应曲线观察 实验目的： 观察针灸效应变化过程的时间特征 以白细胞数量为指标，观察针刺足三里穴对机体防御免疫功能的影响 实验对象： 健康成年家兔，雌雄不拘，体重2-2.5kg 实验器具： 试管架、试管（盛有0.38ml的醋酸龙胆紫溶液）、电针仪、兔盒、血细胞计数板、光学显微镜、盖玻片、吸管、移液管、三棱针、1寸毫针等、白细胞吸管。 实验流程： 一、实验前的准备 1、检查试管、计数板及吸管是否清洁，如有污垢，应先擦拭干净； 2、将装有醋酸龙胆紫溶液(0.38ml)的试管（5个）准备好，并标好序号。 3、将家兔固定，并将家兔耳缘静脉周围兔毛拔除干净。 二、实验中的具体操作 1、用酒精棉球擦拭家兔耳缘静脉，待酒精挥发干后，用三棱针刺破耳缘静脉，然后用白细胞吸管吸血至0.02ml； 2、将血液挤入装有醋酸龙胆紫溶液的试管内，小心吸入少量稀释液冲洗，以冲下附在吸管壁上的血液，轻轻摇匀，待测。 吸管吸取血液后应立即挤入稀释液中，轻轻挤出血液并反复吸洗2～3次，轻轻摇匀，不可用力震荡，以免细胞破碎。 3、将盖玻片置于血细胞计数板上，用移液管将稀释好的血液滴入盖玻片边缘，靠虹吸作用吸入； 4、静置2～3分钟，在显微镜下计数。显微镜镜头选用低倍镜（目镜×10，物镜×10），找到计数板白细胞计数格后计数； 计数时，要注意显微镜的载物台绝对平置，不能倾斜，以免血细胞向一边集中。 血细胞计数板使用方法 计数室的平台距盖玻片0.1mm，中心部位划分为9个大方格，每个大方格长、宽都是1mm，体积 0.1mm3。四角的大方格各由16个中方格组成，适用于白细胞计数。压线者计上不计下，计左不计右。数四角4个大方格的白细胞总数X ，其平均值即为 X/4，则 白细胞数/mm3 = X/4×10×20=50X 5、电针（频率选取10Hz,波形为连续波）家兔两侧“足三里”穴2min后取针，然后取即刻 、10min、 20min、30min耳缘静脉血，镜下计算白细胞数目。 家兔“足三里”穴定位 小腿背外侧上1/5折点处，约当腓骨头下1.2cm，胫骨脊后1cm 三、实验数据的统计与绘图 统计电针前，电针家兔“足三里”穴2min后，取即刻 、10min、 20min、30min耳缘静脉血中的白细胞数量。最后将实验结果绘成一条时间-效应曲线。 自设计实验 采用不同穴位或干预措施 取血时间一致 谢谢！ * * 试管标号1-5 3 电针后10min 显微镜下计数 绘图 家兔固定 5 电针后30min 4 电针后20min 2 电针后即刻 1 电针前 取血 实验步骤： 取血次序应从耳尖向耳根； 取血时应擦去第一滴血，因其含有组织液； 采血要求迅速准确，不能凝血，也不能有气泡，否则弃去重采。 吸管在盖玻片边缘滴出少量稀释血液时，注意不要滴入过多，以免流出到计数室外的凹沟中，造成盖玻片浮起，体积不准，影响计数结果。 厚0.1mm 3mm