葛根黄酮的离和纯化的研究 论文正文.docVIP

毕 业 论 文（设计） 题 目 葛根黄酮的分离和纯化的研究 指导老师 专业班级 生物技术及应用0701 姓 名 学 号 2010年5月30 日摘 要 本研究通过静态和动态实验考察了四种树脂的吸附解吸能力，确定树脂X-5是分离葛根黄酮的最佳树脂；通过考察药液浓度，pH，洗脱溶剂，乙醇洗脱浓度等各种因素确定分离纯化的最佳工艺是：药液浓度为40mg/ml，将药液pH调至酸性条件下进行吸附，用70%乙醇作为洗脱剂。 关键词：葛根总黄酮；大孔吸附树脂；药液浓度；乙醇洗脱浓度 目 录 引言……………………………………………………………………………………1 1 材料和仪器……………………………………………………………………….2 1. 1 实验材料 ………………………………………………………………………2 1. 2 实验仪器 ………………………………………………………………………2 2 实验方法…………………………… …………………………………………….3 2. 1 葛根黄酮粉末的制备 ……… …………………………………………………3 2. 2 标准曲线制作 ……………… …………………………………………………3 2 .3 大孔树脂的筛选 ………… ……………………………………………………3 2. 4 最佳分离工艺的筛选 …………………………………………………………4 3 结果与分析……………………………………………………………………….5 3. 1 标准曲线的绘制………………………………………………………………..5 3. 2 大孔树脂的筛选 ………………………………………………………………5 3. 3 最佳分离工艺的筛选 …………………………………………………………8 4 结论……………………………………………………………………………...10 参考文献 …………………………………………………………………………....11 引 言 葛根为豆科植物野葛或粉葛的块根，有山人参之美称，其主要有效成分为葛根素、大豆苷、大豆苷元等异黄酮类化合物[1]。现代研究表明[2]：葛根总黄酮具有降低心肌耗氧量，增加冠状动脉脑血管流量，缓解心绞痛，抗心律失常，抗氧化，增强机体免疫力，生津止渴等多种药理作用，用于高血压引起的头痛、头晕、耳鸣等症状有明显疗效。我国湖南、广西、江西、山东及西南地区等均有丰富的葛根资源。 一、葛根黄酮类化合物的分离方法： 1. 大孔树脂法：崔九成等[3]用大孔树脂分离葛根黄酮。将浓缩至1ml 相当于0.5g 葛根药材的提取物100ml，加入到50g 处理过的大孔树脂柱上，用蒸馏水洗至流出液色变淡，再用70%乙醇洗脱至无葛根素，洗脱液回收乙醇浓缩并蒸干即得葛根总黄酮，收率为药材总黄酮的84.58%。 2. 盐析纯化法：将葛根粗提物加入蒸馏水后加热煮沸，冷却到室温过滤，再将滤液中加入NaCl后搅拌溶解，静置2d析出白色沉淀,在过滤出沉淀并用少量水洗涤，得葛根异黄酮纯品[4]。 3. 铅盐沉淀法：李稳宏等[5]用铅盐沉淀法对葛根黄酮进行分离。将醇回流法所得浓缩物用95%乙醇溶解，加入饱和中性醋酸铅溶液至不再有沉淀生成为止，过滤，沉淀用水洗2～3次，弃去滤渣，滤液与洗液合并。再加入碱式醋酸铅溶液，至不再有沉淀生成，将沉淀物干燥后悬浮于300ml 95%乙醇中，通入H2S脱铅。过滤后，沉淀用醇洗2～3 次，合并滤液与洗液，调pH为6.5～7.0，减压浓缩回收乙醇至50ml左右，转移至蒸发皿中，真空干燥，得总异黄酮为浅棕色粉末。铅盐沉淀法得到的成品中总异黄酮含量高，可达62.81% ，但其收率较低。 二、大孔树脂吸附法[6] 在各种分离纯化方法中，大孔吸附树脂法是因为其比较环保和低廉倍受欢迎。大孔吸附树脂是一种具有多孔立体结构人工合成的聚合物吸剂，是在离子交换剂和其它吸附剂应用基础上发展起来的一类新型树脂，为用于固体萃取而设计。树脂一般为小球状，直径为0.2～0. 8mm之间，是依靠它和被吸附的分子(吸附质)之问的范德华引力，通过它巨大的比表面物理吸附而进行的。合成吸附剂有大的比表面积和类似活性炭颗粒的内细孔结构，这些多孔特性使之从水溶液中有效的吸附有机化合物。与其它溶剂萃取技术相比用合成吸附萃取剂能减少溶剂的使用量和增加操作的安全性。 与其他分离纯化方法比较大孔树脂吸附法所具有的优点如下： 1. 能缩小剂量，提高中药内在质量和制剂水平。??? 2. 减少产品的吸潮性。??? 3. 大孔树脂吸附技术能缩短生产周期，所需设备简单，