肠灌流模分析课件.pptVIP

Preliminary Studies 前期必须要测定在不同pH缓冲液中化学稳定性。最佳的条件进行肠灌流实验。必要时加入稳定剂(如酸化样品)与提高待测化合物的稳定性。必要时化合物代谢稳定性还要现制备细胞溶解产物进行稳定性研究。必要时需要测定在新鲜制备的小肠组织匀浆(蛋白浓度为10 mg/ml)中稳定性。 Preparation to be done the day before or earlier 检查水浴、手术灯、电热毯，安装好灌流泵； 准备好HBSS缓冲液、生理盐水、化合物储备液确保第二天使用； 所需材料 : 收集灌流液的试管(做好标签) 一次性手套 准备手术流程表格 下午4时前禁食大鼠 Special clean up procedures: 所有的灌流管在实验前一天用75% 乙醇清洗，并在空气中晾干，避免微生物生长。 手术器材清洗干净，保证无血渍，吹干或浸人75%乙醇。 该方法用灌流过程中化合物降低的速率来测定灌流化合物的稳态吸收，可用以下方程计算： (2) - (4), Co 和 Cm分别表示进口和出口浓度；式中Gz(Gz＝πD L /2 Q)为流速（Q）、小肠长度（L）和扩散系数（D）的无因次渗透性换算因子，A为小肠持水性校正因子。两组间数据的比较采用双侧t 检验。 4、数据处理与计算 在体大鼠肠灌流模型 XXXX大学硕士研究生课程 在体肠灌流模型是一种广泛应用于药物吸收的原位单向小肠灌流模型。是被FDA认可的进行药物吸收研究的两种模型之一，可以用来对药物或候选药物的进行生物药剂学特性研究。 1、在体肠灌注模型产生的背景、发展历史 在体肠灌流模型由Dr. Gordon L. Amidon’s 实验室（Department of Pharmaceutical Sciences, College of Pharmacy, University of Michigan）在1980’s发明，刚开始每次用一个肠段试验，考察在特定pH下，有无抑制剂对化合物的吸收特性影响。关注于层流的维持与完整，这对于测定化合物的真实膜渗透性(Pw)很重要。 后来发现空肠的Pw与人的吸收百分率呈相关性。 Hans Lennern?s. Animal data: The contributions of the Ussing Chamber and perfusion systems to predicting human oral drug delivery in vivo. Advanced Drug Delivery Reviews 59 (2007) 1103–1120 近来，开始几种不同的方式来优化该模型： 第一，同时测定四个肠段(十二指肠、空肠、回肠和结肠)，这一优化显著减少了使用动物的数量； 第二，测定部位依赖性代谢产物，这对于确定小肠不同部位代谢物的外排很重要，黄酮和异黄酮的II相代谢的肠外排取决于酶的活性和载体的外排能力； 第三，通过插入胆汁导管，确定小肠和肝脏对II相代谢产物的外排的作用； 第四，通过测定门静脉母体化合物和其结合物的浓度，确定小肠代谢的程度。 Rat Intestinal Perfusion Model D J I C Perfusion Solution Perfusate 0.1-0.4 ml/min Heated to 37oC Control Four-site simultaneous perfusion model of rat intestine Perfusion Pump Flow rate may be changed to increase absorption/metabolism during single pass perfusion. 该模型的优点是保证了肠道神经以及内分泌输入的完好无损，同时也保证了血液及淋巴液的供应，提高了生物活性。该方法以较低的流速(0.2～0.3 mL·min-1)对某一肠段进行单向灌流，根据进出入口处灌流液中的药物浓度差考察药物在该肠段的吸收，其实验条件与口服给药后药物接触的肠道环境较接近，吸收速率稳定，与人体有良好的相关性。特别适合于研究主动转运与小肠代谢。 2、模型的特点 在体肠灌流模型既可以来确定吸收和代谢的部位，区域吸收和代谢对于设计持续释放剂型提供非常有意义的信息。 小肠特定肠段不吸收或其他肠段广泛的首过代谢常用于判断药物是否适合采用持续释放剂型，常采用能避开首过代谢的剂型。 在体肠灌流模型中可从肠腔取样，又可从血液、胆汁中取样。虽然这些研究常在麻醉的小动物上进行，但借助肠插