医学HLC法测血清奥氮平浓度.docVIP

HPLC法测血清奥氮平浓度 【摘要】用高效液相色谱法测定血清中奥氮平的药物浓度，方法简便、快速、灵敏、特异，适用于临床常规和研究应用。 【关键词】高效液相色谱法奥氮平 奥氮平为苯并异唑衍生物，是新一代的抗精神病药物，并已广泛应用于临床，因而在临床上误服、服毒自杀时有发生。为了配合临床上的急救以及使给药方案更加合理化，我们建立了奥氮平的液相色谱定性定量的分析方法。 1材料和方法 高效液相色谱法在药物分析中的应用是近年来飞速发展的新技术。目前，用HPLC法快速测定血中奥氮平浓度的方法国内报道甚少，我们在参考国外有关文献资料的基础上结合临床实际，试图在国内首先建立一个取样量少、分析周期短、灵敏度高的实验方法，以满足临床实际的需要。 1.1实验部分 1.1.1仪器及试剂 (1)仪器美国惠普HP1050高效液相色谱仪伴惠普HP1050紫外分光检测仪及色谱工作站。色谱柱为200×4.6mm不锈钢柱，内充5μmSpherisorbC18(34/73)。 (2)标准物奥氮平标准对照品。 (3)溶剂甲醇；三氯乙酸CCl3COOH；乙酸乙酯CH3COOC2H5；四硼酸钠Na2B4O7·10H2O；磷酸氢二钠Na2HPO4·12H2O；水为双重蒸馏水。 1.1.2试剂配制 （1）标准储备液用双重蒸馏水配成1mg/ml溶液，4℃保存。 （2）标准应用液用双重蒸馏水稀释成100μg/ml溶液，4℃保存。 （3）50mmol/LNa2HPO4缓冲液准确称取8.9535gNa2HPO4·12H2O于500ml容量瓶中加双蒸水至刻度。 （4）0.05mmol/L四硼酸钠溶液准确称取1.90685gNa2B4O7·10H2O于100ml容量瓶中加双蒸水至刻度。 （5）准确称取10gCCl3COOH于100ml容量瓶中加双蒸水至刻度。 （6）流动相取甲醇、双重蒸馏水按70:30的比例（v/v）配制，用前超声波脱气。 1.1.3实验方法 （1）色谱条件 分析柱：色谱柱：Spherisorb-C184.6×200mm。 流动相流速：1ml/min。 检测波长：276nm。 满量程吸光度：0.02。 记录仪纸速：4mm/min。 柱温：室温。 （2）病人标本收集和保存 病人服用固定剂量达稳态血药浓度后，于清晨服药前取肘或颈静脉血2ml，及时分离出血清。不能及时测定的血清密封后冰冻保存。（3）样品的预处理 ①取血清1ml，加入10%三氯乙酸1ml，在旋涡混合器上混合振荡2分钟。 ②在3000r/min离心机上离心5min后，取出上清液，加入乙酸乙酯/0.05mol/L四硼酸钠（50:25v/v）振荡8min，经3000r/min离心5min后，取上清液，N260℃吹干。残渣用100μl流动相溶解，取20μl进行液相色谱分析。 2计算 测出药物的峰面积，以血清应用液的峰面积为自变量，浓度为因变量，算出相关系数及回归方程，用标本的峰面积由回归方程算得结果。 3结果 3.1色谱行为在本实验条件下，奥氮平保留时间为4.9min。 3.2线性关系及检测限在空白血浆中分别添加奥氮平使血药浓度相当于2、5、10、20g/L,在上述实验条件下进行分析，所得数据经计算机进行回归，得到峰面积A与质量浓度C（g/L）的关系： A=1.78×104+0.12×104C；相关系数为0.99。 3.3回收率与精密度配制含奥氮平质量浓度分别为2、5、10、20g/L的标准血浆样品各五份，在上述实验条件下进行分析，测得血浆中奥氮平回收率；另取上述四种质量浓度标准血浆，对每一质量浓度当日测定5次，求得日内相对平均偏差；四种质量浓度的血浆放置于冰箱保存，每天测1次，连续测定5次，求得日间平均相对偏差 3.4检测波长对奥氮平的标准溶液（g/L）进行全波长扫描，在276nm外有较强的吸收，故选定检测波长为278nm。 4讨论 4.1本文采用HPLC法测血清奥氮平浓度，具有操作简单、取样量少、分析周期短、灵敏度高的特点，使奥氮平血药浓度的得知快速、简洁。 4.2经专属性考察，常用的抗精神病药（氯氮平、冬眠灵、奋乃静）在该色谱条件下对奥氮平的测定无干扰。 4.3本文采用血样经三氯乙酸沉淀蛋白后进样的方法来测定，经上百次试验，对柱压无明显影响。 4.4本实验方法对病人无痛苦，对实验人员无危害。对节省医院及病人非合理用药造成额外治疗费具有很大意义。 参考文献 [1]张仁斌.高效液相色谱法在医药研究中的应用.上海科技出版社，1983：145. [2]陆明廉.血液浓度测定与临床应用.第一版.上海科技出版社，1986：160. 财务出纳工作手册 [财务出纳工作手册]财务出纳工作手册一、日常工作： 1、严格执行现金管理和结算制度，定期