高级生化试验实验三血清白等电聚焦电泳.pptxVIP

;电泳是指带电粒子在电场的作用下，发生定向泳动的现象。 电泳技术指利用电泳现象对混合物进行分离分析的技术。; COO- COO- COOH ╱ + H+ ╱ + H+ ╱ Pr ←————→ Pr ←————→ Pr ╲ + OH- ╲ + OH- ╲ NH2 NH3+ NH3+ PHPI PH=PI PHPI; ;ν/X 用U表示，称迁移率（mobility）, 即带电颗粒在单位电场强度下的移动速度;影响电泳速度的因素：; 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白;按凝胶装置分为盘状电泳及板状电泳 盘状电泳通常是不连续系统，利用缓冲液离子成分、pH、凝胶孔径进行电泳，带电颗粒电泳时具有电荷效应、分子筛效应、 浓缩效应。;以聚丙烯酰胺作为支持介质的一种电泳技术。凝胶是单体聚丙烯酰胺（Acr)和交联剂甲叉双丙烯酰胺(Bis)交联而成的，催化剂为过硫酸铵(AP)，加速剂为四甲基乙二胺TEMED, 形成三维网状凝胶。 ;;;分子筛效应：分子量或分子大小和形状不同的蛋白质通过一定孔径分离胶时，受阻滞的程度不同而表现出不同的迁移率，这就是分子筛效应。当样品进入分离胶，凝胶孔径变小，分子量小，阻力小，移动快；分子量大，阻力大，移动慢。 电荷效应：电荷量不同，迁移率不同。;实验步骤; 2. 上样和电泳：将凝胶管插入电泳槽槽底橡胶塞孔中，加入电极缓冲液与下电泳槽，随后放入凝胶管及上槽，除气泡, 加样品液50μl至浓缩胶面。加电解液直至装满上电泳槽。电泳约1.5hr。 3. 染色，观察结果：将胶从玻璃管中取出，注意不要弄断凝胶。凝胶考马斯亮蓝染色，然后脱色，脱色至背景清晰。观察结果。 ;结果示意图：;;原理;条件:两性载体电解质---产生pH梯度 ;实验步骤;;1．丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺是神经毒性试剂，对皮肤有刺激作用，注意避免直接接触。 2．制胶时，要充分摇匀，加速剂TEMED最后加。 3．注意观察实验现象：分界面，浓缩效应. 4. 固体胶切忌倒入水池。