Genistein对K562细胞生长及CyclinD1基因和bcr┐abl融合基因表达影响.docVIP

Genistein对K562细胞生长及CyclinD1基因和bcr┐abl融合基因表达的影响 作者：王玮　孙秉中　于文彬　冯琦 【关键词】染料木黄酮 　　关键词:染料木黄酮;CyclinD1基因;CDK4蛋白;bcr-abl融合基因 　　摘要:目的研究Genistein抑制K562细胞生长的机制及对CyclinD1基因和bcr-abl融合基因表达的影响.方法用RT-PCR方法检测Genistein作用于K562细胞前后CyclinD1基因和bcr-abl融合基因的mRNA表达变化，用免疫荧光、流式细胞仪和电镜检测CDK4蛋白的表达、细胞周期及凋亡.结果K562细胞中CyclinD1基因、bcr-abl融合基因的mR-NA和CDK4蛋白表达阳性，用Genistein与K562细胞共同孵育后，bcr-abl融合基因的mRNA表达阴性，CyclinD1的mRNA和CDK4蛋白表达下降，细胞阻滞于G2/M期，K562细胞出现凋亡.结论bcr-abl融合基因、CyclinD1基因和CDK4蛋白在K562细胞中高表达，Genistein能使K562细胞生长受抑，诱导其凋亡，抑制bcr-abl基因的mRNA表达，并使CyclinD1基因的mRNA和CDK4蛋白表达下降，表明bcr-abl融合基因、CyclinD1基因和CDK4对慢粒发展存在内在关系. 　　Keywords:Genistein;CyclinD1gene;CDK4protein;bcr-ablfusiongene 　　Abstract:AIMToinvestigatethemechanismofhowGenis-teinrestrainsthegrowthofK562cells，anditseffectontheexpressionofCyclinD1geneandbcr-ablfusiongene.METHODSGenisteinwasincubatedwithK562cells，themRNAofCyclinD1geneandbcr-ablfusiongenewereexam-inedbyRT-PCRandtheexpressionofCDK4protein，cellcy-cleandapoptosiswereexaminedbyimmunofluorescence，flowcytometryandelectron-microscopeatthesametime.RESULTSTheexpressionofCyclinD1geneandbcr-ablfu-siongene’mRNAwaspositiveinK562cells.AfterK562cellswasincubatedwithGenistein，theexpressionofbcr-ablfusiongenemRNAandCDK4proteinwerenegative，mRNAofCyclinD1genedecreased.AndthecellwasblockedinG2/Mphase.Usingelectron-microscopewecouldobservethecellsapoptosis.CONCLUSIONCyclinD1geneandbcr-ablfusiongenearehighlyexpressedinK562cells.ThegrowthofK562cellscouldberestrainedbyusingGenistein，whichinducesK562cellsapoptosis，represstheexpressionofbcr-ablfusiongene，andmakesCyclinD1andCDK4proteinde-crease.ThisilluminatesthatCyclinD1gene，CDK4proteinandbcr-ablfusiongenemayhaverelationtothepathogenesisofchronicmyelogenousleukemia（CML）. 　　0引言 　　肿瘤的发生、发展与细胞周期调控失调密切相关，细胞周期有关的原癌基因（如CyclinD1）与细胞增殖相关的癌基因（如bcr-abl）在肿瘤发展上存在密切关系.已有文献［1，2］报道，用RT-PCR方法检测到K562细胞中CyclinD1基因和bcr-abl融合基因的mRNA高表达，我们进一步用酪氨酸激酶抑制剂Genistein作用于K562细胞后，观察CyclinD1基因、bcr-abl融合基因的mRNA和CDK4蛋白表达的变化，同时观察Genistein对K562细胞生长、周期变化及凋亡的影响，探讨其抑制K562细胞生长的机制. 　　1材料和方法