溶菌酶的提取分离和纯化实验报告.docVIP

生物工程综合实验 溶菌酶的提取、分离纯化及其活性测定 实验报告集 班级 生工1411 学号 组别 7 姓名 实验室学生守则 一、严格遵守实验室各项规章制度和管理措施，服从教师及实验技术人员 的指导。 二、严格按照实验要求，做好实验预习,实验之前5分钟进入实验室，及时、 准确地完成实验任务，实事求是地完成实验报告，杜绝弄虚作假。 三、严格执行操作规定，爱护仪器设备及工具。凡不按教师的指导擅自操 作引起仪器、设备损坏者，应予赔偿。 四、爱护实验室公共财物，节约水电、材料和试剂。未经允许不得随便挪 动非实验需用的其他仪器，不得随便拆装仪器或将仪器、工具带至室 外。 五、持实验室的严肃安静，不得大声喧哗、嘻闹，严禁在实验室内抽烟和 吃东西。 六、严防事故，确保实验室安全，发现异常情况，应及时向有关教师和管 理人员报告。 七、每次实验结束后，主动整理好仪器设备，归还所借器材，关闭电源、 水源，按指导老师的要求做好实验结束工作及室内外的清洁卫生工作， 经指导老师许可后，方可离开。 预 习 报 告（手写，可自行续页） 名称 溶菌酶的提取、分离纯化及其活性测定 实验目的和要求： 实验材料： 主要仪器： 主要步骤： 教师签名： 时间： 实验报告 溶菌酶的提取、分离纯化及其活性测定 一、 目的 对从鸡蛋清中提取并分离纯化出溶菌酶进行活性测定管号0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 蒸馏水 (mL)1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0 考马斯亮蓝 (mL)4 4 4 4 4 4 蛋白质含量 (μg/mL)0 20 40 60 80 100 OD595 0 0.222 0.434 0.648 0.802 0.948 （2）待测样品蛋白浓度测定 管号E1 E2 E3 E4 蛋白质待测样品提取液 (mL)0.1 0.1 0.1 0.1 蒸馏水 (mL)0.9 0.9 0.9 0.9 考马斯亮蓝 (mL)4 4 4 4 OD595 2.374 1.009 0.038 0.972 蛋白质含量 (μg/mL) 244.07 101.88 0.74 98.03 分析：由图中数据与制作的蛋白质标准曲线的样品比较可知，经过处理后，E1，E2的蛋白质的含量的数值急剧下降，到E3已经几乎趋于0，可表明溶菌酶粗提取的过程中已经除去了大量的杂蛋白，得到了进一步分离纯化后的蛋白质。 2、酶活力实验结果 酶活力测定结果时间 A0s A180s 酶的活力单位数 E1 0.682 0.625 19 E2 0.625 0.585 13.3 E3 0.685 0.661 8 E4 0.822 0.537 95 根据实验所得的E1 ～ E4各样品，汇总结果如下表所示 样品 体积ml 蛋白浓度mg/ml 总蛋白mg 酶活力u/ml 比活力u/mg 总活力U 回收率% 提纯倍数 E1 V1=57.5 0.244 14.03 31 127.0 1782.5 100% 1 E2 V2=134.8 0.102 13.75 13.3 130.4 1792.8 100.5% 1.03 E3 -- 0.00074 ---- 8 ---- ---- ---- ---- E4 V4=4.2 0.098 0.41 95 973.2 399 22.4% 7.66 分析：由上述数据可知，吸光度值总体呈下降趋势，且随着时间的推移,在杂蛋白提纯后，样品E4的酶活力和比活力较先前的E1和E2有了极大的增长，说明经过提纯后，所需要的酶活性增加，但总活力下降，说明溶菌酶的纯度比较好。 3、电泳实验结果 分析:聚丙烯酰胺凝胶电泳可根据不同蛋白质分子所带电荷的差异及不同迁移率将蛋白质分离成若干条区带，如果分离纯化的样品中只含有同一种蛋白质，蛋白质样品电泳后，就应只分离出一条区带。SDS能够和蛋白质分子结合成复合物，掩盖了各种蛋白分子间天然的电荷差异，各种蛋白质 SDS复合物在电泳时的迁移率，不再受原有电荷和分子形状的影响，只与分子量有关，这种方法常用来鉴定蛋白质分离样品的纯化程度。根据以上原理和 体积ml 蛋白浓度mg/ml 总蛋白mg 酶活力u/ml 比活力u/mg 总活力U 回收率% 提纯倍数 E1 V1=57.5 0.244 14.03 31 127.0 1782.5 100% 1 E2 V2=134.8 0.102 13.75 13.3 130.4 1792.8 100.5% 1.03 E3 -- 0.00074 ---- 8 ---- ----