布鲁氏菌多克隆抗体和单克隆抗体制备与鉴定-preparation and identification of polyclonal and monoclonal antibodies against brucella.docxVIP

缩略词索引表英文缩写英文全称中文译名DMSODimathylsulfoxide二甲基亚砜DNADeoxyribonucleicacid脱氧核糖核酸ELISAEnZyme-linkedimmunosorbentassay酶联免疫吸附试验IgImmuneglobulin免疫球蛋白IgGImmuneglobulinG免疫球蛋白GPGPeptidoglycan聚肽糖O-psO-polysaccharideO链多糖TEMEDTetramethylethylenediamine四甲基乙二酸DMEMDulbecco5modifiedeaglemediumDMEM培养基McAbMonoclonalantibody单克隆抗体HATHypoxanthin、aminopterin、thymidine次黄嘌呤、甲氨蝶呤、胸腺嘧啶核苷HTHypoxanthineandthymid次黄嘌呤和胸腺嘧啶8-AG8-azaguanine8-杂氮鸟嘌呤BSAAlbuminBovineSerum牛血清白蛋白TMBTetramethylbenzidine3′,3′,5′,5′,-四甲基联苯胺SDSSodiumdodecylsulphate-polyacrylamidegelelectrophoresis十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳ODOpticaldensity光密度PEG-4000PolyethyleneGlycol-4000聚乙二醇-4000HRPHorseradishperoxidase辣根过氧化物酶LPSLipopolysaccharide脂多糖S-LPSSmooth-lipopolysaccharide光滑型脂多糖R-LPSRough-lipopolysaccharide粗糙型脂多糖TKThymidinekinases胸腺嘧啶核苷酶HGPRTHypoxanthinguaninephosphribosytransferase次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸糖转移酶OMPOutermembraneprotein外膜蛋白独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得河北农业大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：签字日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解河北农业大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权河北农业大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。（保密的学位论文在解密后适用本授权书）学位论文作者签名：导师签名：签字日期：年月日签字日期：年月日学位论文作者毕业后去向：工作单位：电话：通讯地址：邮编：1引言布鲁氏菌是一种革兰氏阴性、兼性胞内寄生菌，最初人们根据致病性及的不同和宿主特异性,将布鲁氏菌分为6个种,即马尔他布鲁氏菌(B.melitensis)、流产布鲁氏菌(B.abortus)、猪布鲁氏菌(B.suis)、绵羊布鲁氏菌(B.ovis)、犬布鲁氏菌(B.canis)和沙林鼠布鲁氏菌(B.neotomae)。20世纪90年代,人们陆续从海洋动物包括海豹、海豚、小鲸鱼、鲸鱼及水獭中分离到了第7种布鲁氏菌,并且证明从海洋动物中分离到的布鲁氏菌的致病性和分子特征与上述6种布鲁氏菌不同,是一种新的布鲁氏菌,虽然目前这种布鲁氏菌还没有得到正式命名,但已经被普遍认可[1]。由布鲁氏菌引起的疾病称为布鲁氏菌病，它是世界上最普遍的细菌性动物传染病之一，同时也是人布鲁氏菌和造成经济损失的重要原因。到目前为止，已证明这7个种属的布鲁氏菌都可以导致疾病的发生[2]。我国人布鲁氏菌病疫情在80年代末至90年代初期曾得到较好控制，发病率一度低至0.02/10万左右，90年代中后期，布病疫情有所回升，如1996年-2005年，全国人间布病发病率从0.09/10万上升到1.50/10万，10年间上升了16.7倍。2006年，全国共报告发病19013例，远远超过历史发病人数最多的1963年（12097例）。截至2007年9月底，全国共报告布病病例18116例，较2006年同期（17644例）上升了2.68%，部分省区甚至出现暴发和流行。鉴于此，为了更好的阐明布鲁氏菌和机体之间的作用机制及布鲁氏菌的检测，并且考虑到多克隆抗体和单克隆抗体本身的优缺点及适用范围，我们同时制备了这两种抗体，并进行了初步鉴定，为以后酶标抗体的制备和布鲁氏菌的检测打下基础。1.1布鲁氏菌细胞膜结构及组成成分布鲁氏菌细胞