变溶菌素发酵生产及在口腔制品中应用-fermentation production of mutabilis and its application in oral products.docxVIP

山东轻工业学院硕士学位论文 山东轻工业学院硕士学位论文 第 1 第 1 章 绪 论 PAGE PAGE 13 PAGE PAGE 10 第 1 章 绪论 变溶菌素(Mutanolysin)是一种为微生物溶菌酶，它是由球孢链霉菌(Streptomyces globisporus)发酵得到的由几种不同溶菌酶组成的多酶体系。这种溶菌酶群在龋齿的防 治、获取细胞壁和细胞质膜结构，制备原生质体以及食品的防腐等领域都有着广泛的应 用前景,对变溶菌素的研究也越来越受到重视，有望产生巨大的经济和社会价值。 1.1 微生物溶菌酶 溶菌酶(Lysozyme), 又称为胞壁质酶，广泛分布于自然界中,在高等动植物组织及 分泌物、昆虫、原生动物和微生物中都发现有溶菌酶存在[1]。最早被发现和研究的溶细 菌酶是卵清溶菌酶，它被广泛应用于医药、食品和饲料等行业，但因为其溶菌谱有限， 使得其应用受到了很大的限制，微生物溶菌酶的研究就是以寻找能够分解卵清溶菌酶不 能分解的细菌的溶菌酶为目的开始的。微生物溶菌酶不仅具有卵清溶菌酶的相关优点, 而且其溶菌谱比卵清溶菌酶更为广泛，正在引起国内外研究机构的重视。 1.1.1 微生物溶菌酶的研究历史 对微生物产生溶菌酶的研究发现,最早可追溯到 Nicoile 在 1907 年发表有关枯草芽 孢杆菌溶解因子的报告[2]。从上个世纪中期开始，分别有拟内串生孢霉(Chalarosis)、灰 色链霉菌(Streptomyces griseus)、球孢链霉菌(Streptomyces globisporus)、蜡状芽孢杆菌 （Bacilus cereus）、乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)、肺炎链球菌(S.pneumoniae)、丙酮 丁酸梭菌(Clostridium acetobutylicum)以及其他几种噬菌体产生的溶菌酶被深入研究，德 国和日本在微生物溶菌酶方面的研究较为发达,并且已经出现商业化生产的微生物溶菌 酶[3][4]。 1.1.2 微生物溶菌酶的分类 微生物产溶菌酶主要有 3 种：N-乙酰己糖胺酶、酰胺酶、内肽酶[1]。在微生物的发 酵液中往往存在许多溶菌作用相关因子，相互协同促进溶菌作用。 N-乙酰己糖胺酶 N-乙酰己糖胺酶与卵清溶菌酶一样,它能分解组成细胞壁骨架的聚糖，是最为重要 的溶细胞壁溶解酶，它属于糖苷酶型的微生物溶菌酶。N-乙酰己糖胺酶有两种，一种是 N-乙酰胞壁酰胺酶，该种酶能水解 N-乙酰胞壁酸与 N-乙酰氨基葡萄糖之间的 β-1，4 键； 一种是 N-乙酰氨基葡萄糖苷酶，它能水解 N-乙酰氨基葡萄糖与 N-乙酰胞壁酸之间的 β-1，4 键[2]。 N-乙酰胞壁酰胺酶与 N-乙酰氨基葡萄糖苷酶这两种溶菌酶都是作用于 β-1，4 糖昔 键[1]。最常用的卵清溶菌酶是 N-乙酰胞壁酰胺酶，但是当它以甲壳质作为作用底物时， 又表现出内-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶的活性。由微生物产生的糖苷酶型溶菌酶对甲壳质 没有活性，但当它作用于肽聚糖时，可能切开 N-乙酰胞壁质酸与 N-乙酰氨基葡萄糖间 的 β-1，4 键，也可能是切开 N-乙酰氨基葡萄糖与 N-乙酰胞壁质酸间的 β-l，4 键，尚未 发现对二者都有作用的酶[5]。已知大部分糖苷型溶菌酶都属于酰胺酶。 酰胺酶 N-乙酰胞壁酸-L-丙氨酸酰胺酶(N-acetylmuramy-L-alanine amidase，简写 MA 酰胺 酶),它能够切断肽与肽聚糖之间结合位点,又称作自溶素(Autolysin),报道中称白色链 霉菌 H 等发酵产生的溶菌酶系中含有酰胺酶,它在一些菌体细胞的自溶作用上发挥重要 作用[6]。 内肽酶 内肽酶能切断肽聚糖肽段部分含有的肽键，内肽酶单独存在时溶菌作用不是很明显, 而在有葡聚糖酶存在时，内肽酶能显著促使真菌的细胞壁溶解[7]。目前共发现 20 多种 能够溶解微生物菌体的微生物产内肽酶，如白色链霉菌（Streptomyces albus）H 所产生 的内肽酶、葡萄球菌 (S.epidermides) 所产的葡萄球菌素 (Lysostaphin) 、粘杆菌 (Myxobacter)AL-1 的内肽酶、堆囊菌(Sorangium)的 α，β 酶、球孢链霉菌(Streptomyces globisporus)产生的 AM3 内肽酶等均是著名的溶菌性内肽酶。产生内肽酶的微生物还有 枯草杆菌（Bacillus subtilis）、无色杆菌(Achromobacter)、气单抱杆菌(Aeromonas)、黄杆 菌(Flavobacter)、巨大芽抱杆菌（Bacillus megaterium）等等。许多溶菌性内肽酶的作用 位点己研究清楚[2]。 1.1.3 几种典型的微生物溶菌酶的研究进展 除了本文所研