吡格列酮下调dcsign表达抑制树突状细胞粘附和迁移-pioglitazone down-regulates dc sign expression to inhibit dendritic cell adhesion and migration.docx

浙江失擘硕士毕业论文论文摘要吡格列酮下调DC—SIGN表达抑制树突状细胞粘附和迁移中文摘要【目的】动脉粥样硬化(artherosderosis，AS)目前被认为是一种炎症和免疫性疾病。树突状细胞(dendriticcells，DCs)是体内最强的专职抗原递呈细胞(antigenpresentingcells，APCs)，树突状细胞特异性细胞间黏附分子一3捕获的非整合蛋白(DC．specificICAM一3grabbingnonintegrin，DC-SIGN)是DC表面一种新型的凝集素受体。吡格列酮(Pioglitazone，Pio)是新一代的噻唑烷二酮类(thiazolidinediones，TZD)胰岛素增敏剂，最近发现对AS有一定的作用。我们通过研究Pio对DC表面DC．SIGN表达的影响，探讨Pio调节DC粘附和迁移功能拮抗动脉粥样硬化形成的可能机制。【方法】1、各种细胞的分离和培养：(1)用淋巴细胞分离液从健康成人外周血白细胞悬液分离单个核细胞，再用CDl4+磁珠分选出纯度大于98％的CDl4+单核细胞，用含20ng／mlrhGM-CSF(recombinanthumangranulocytemaerophage-eolonystimulatingfactor)、10ng／mlrhlL-4(recombinanthumaninterleukin-4)、10％胎牛血清(fetalbovinesoltim，FBS)的RPMll640培养基培养，第5天收集悬浮细胞作为未成熟DC。(2)用O．1％I型胶原酶从健康产妇剖宫产脐带消化获得人脐静脉内皮细胞(humanumbilicalveinendothelialcells，HUVECs)，用含15％FBS，10ng／mlrhEGF(recombinanthumanepidermalgrowthfactor)的M199培养基培养，用抗Ⅷ因子抗体鉴定呈阳性。浙江失擘硕士毕业论文2、细胞干预：使用不同浓度的Pio(O．1panol／L、1．0gmol／L、10lunol／L)加或不加过氧化物酶体增殖物活化受体吖拮抗剂GW9662(10p．mol／L)干预DC24h。3、各种指标的检测：然后通过Westernblot试验和免疫荧光试验检测Pio对DC表达DC-SIGN蛋白的影响，运用细胞粘附试验检测Pio对DC粘附功能的作用，运用细胞迁移试验检测Pio对DC迁移功能的作用。【结果】1、在倒置显微镜下见DC悬浮生长，聚集成簇，有大量胞质突起。2、Pio呈浓度依赖性下调DC-SIGN蛋白的表达，Pioi．0ltmol／L时就开始明显减少(Po．05)，尤其在较高浓度Pio10ltmol／L时，DC．SIGN蛋白表达的减少更明显(P(o．01或P0．001)，而且此作用能被GW9662逆转(P．，o．05或P0．01)。3、Pio呈浓度依赖性抑制DC粘附和迁移功能，Pio1．0limol／L时就开始明显降低(Po．05)，尤其在较高浓度Pio10；tmol／L时，DC的粘附和迁移降低更明显(P．0．001或P0．01)，而且此作用能被GW9662逆转(尸≮O．001或P0．05)，同时经抗DC．SIGN抗体作用后DC粘附和迁移较空白对照明显降低(Po．001或P0．01)。【结论】1、Pio呈浓度倚赖地下调DC表面DC．SIGN蛋白的表达，这种作用可以被PPAR-y拮抗剂GW9662逆转。2、Pio呈浓度依赖性抑制DC的粘附和迁移，这个过程同样可以被PPAR-y拮抗剂GW9662逆转。3、Pio通过激活PPAR-T下调DC．SIGN蛋白的表达，抑制DC的粘附和迁移。【关键词】树突细胞；内皮细胞；动脉硬化；过氧化物酶体增殖物活化受体；细胞粘附分子浙江欠擘硕士毕业论文Pioglitazoneinhibitsdendriticcelladhesionandtransmigrationthroughdown·-regulationofDC--SIGNABSTRACTobjegtiveAtheroscleroficcardiovasculardiseaseisthemaincauseofdeath．whichbeginsasaninflammatoryimmunologicalreaction．Dendriticcells(DCs)areprofessionalantigenpresentingcells(APCs)whichmakeanessentialfunctioninimmunereactions．DC—specificICAM一3grabbingnonintegrin(DC—SIGN)isanovelDC-specificadhesionreceptorthattakespartinthei