第五章_种子的扩大培养_(m).pptVIP

第五章  种子扩大培养 种子的扩大培养 种子的扩大培养 种子的培养方法 固体培养法 液体培养法 固体培养法 固体试管 →三角瓶 →种曲 →麸曲(机械通风制曲) 液体培养法  现代生物技术的发展是以基因工程菌为主导的微生物发酵领域，其菌种的培养要求无菌程度高，而且培养过程中的条件要求也非常严格(否则易发生变异导致质粒丢失)，从这种意义上讲，固体菌种的制备是难以实现的，因此，应以液体培养为主导方式。 第一节 种子制备工艺 一、实验室阶段 一、实验室阶段 一、实验室阶段 2、培养基选择的原则 一、实验室阶段 二、生产车间阶段 二、生产车间阶段 2、培养基选择的原则 二、生产车间阶段 3、发酵级数的确定 二、生产车间阶段 发酵级数确定的依据 4.各级种子的移种方法 (1)压差接种法 存种子的瓶上装有橡皮管，在火封下与罐的接种口相连接，利用两者的压力差使种子进入罐内，要求瓶与橡皮管的连接不漏，橡皮管与接种口的大小一致。 ??(2)微孔接种法 利用注射器在罐的接种口橡皮膜上注入罐内进行接种，在操作时要注意防止注射器针孔堵塞。 ?  第二节 影响种子质量的因素 判断种子优劣的指标 细胞或形态 生化指标 二 影响种子质量的因素 （一）影响孢子质量的因素及其控制： 培养基 培养温度和湿度 培养时间和冷藏时间 接种量 1.培养基 种属 原料来源 灭菌 代谢影响 2.培养温度和湿度 冬季：气候干燥，空气相对湿度偏低，斜面培养基内水分蒸发快，导致斜面下部含水多，上部干瘪，孢子从下往上长； 夏季：气候潮湿，空气相对湿度较高，斜面培养基内水分蒸发慢，孢子从上往下长，下部常积存冷凝水，不利于孢子生长。 3.孢子龄和冷藏时间的影响 过于年轻的孢子，经不起冷藏； 过于衰老的孢子，生产力下降； 冷藏时间：宜短不宜长。 4.接种量的影响 接种量过小：菌落疏松； 接种量过大：菌落密集。 （二）影响种子质量的因素 1.培养基： 种子培养基因不同的微生物种类差别是很大的，同一种微生物因不同的扩大培养过程(一级、二级)其培养基往往也有较大差异。 通常，对于种子用的培养基，摇瓶与种子罐用的培养基也不相同 摇瓶要求培养基用的原材料精细，碳源浓度较低而且是用微生物较易利用的碳源； 对于种子罐用培养基，要求使用接近大生产用的原材料，氮源浓度较高，有利于菌体的增殖。 例如：HASS(高温淀粉酶) 三角瓶用碳源：葡萄糖+乳糖 3m3种子罐：液化淀粉 温度 种子扩大培养的温度，从试管到三角瓶到种子罐，其温度也应逐步调整，最后接近大生产的温度，目的在于使菌种逐渐适应。 例如：啤酒酵母扩大培养 固体 → 液体→ 三角瓶→大三角瓶→ 汉逊罐 28℃ 25℃ 20℃ 15℃ 10-15℃ 氧的供给 菌种扩大培养的目的就是提供大量的强壮的菌体，因此在扩培过程要求菌体增殖速度越快越好，增殖期消耗的底物葡萄糖越少越好，从这个意义上讲，扩培过程中应提供足够的氧气，无论是厌氧发酵还是好氧发酵。 足够的溶氧取决于：搅拌转速、通气量、搅拌轴功率等，后述。 pH值 菌种扩大培养的pH值很重要，直接影响到菌体的正常生长，需要注意以下两点： (1)扩培选择的pH值是菌体的最适生长pH值，往往与发酵最适pH值不同。 (2)培养基灭菌后，通常其pH值要下降0.5——1.0个单位，因此，…… (三角瓶灭菌后，不能够调整pH值，不宜无菌操作) 采用三级种子的谷氨酸发酵工艺 培养基成分表 种子制备的技术概要 三级种子的特点： 种子制备的技术概要 3、种龄 种子制备的技术概要 种子制备的技术概要 4、接种量的确定 5、种子的质量要求 种子制备过程举例 一、谷氨酸生产的种子制备 一、谷氨酸生产的种子制备 1、斜面 (AS1.299) 一、谷氨酸生产的种子制备 2. 一级种子（摇瓶） 一、谷氨酸生产的种子制备 3. 二级种子(种子罐) 一、谷氨酸生产的种子制备 种子的质量要求： 种子制备过程举例 二、青霉素生产的种子制备 二、青霉素生产的种子制备 一、斜面孢子 二、青霉素生产的种子制备 二、大米孢子 二、青霉素生产的种子制备 3、一级种子 二、青霉素生产的种子制备 种子的质量要求 种子的扩大培养 小结 思考题 种子扩大培养的定义与目的 种子制备的主要方法和阶段。 种子罐的级数确定因素，移种的主要方法。 种子的质量标准，影响孢子和种子质量的因素。 斜面→一级种子（1200ml/5000ml三角瓶）→二级种子（2m3） →三级种子（20m3)→发酵（240m3) 154 / 240 m3 玉米淀粉双酶糖 13-14， 玉米浆 0.06-0.08 ，甘蔗糖蜜