槟榔碱和细胞外钙离子诱导角质形成细胞s100a7 mrna表达的研究-study on expression of s100a7 mrna induced by arecoline and extracellular calcium ions in keratinocytes.docxVIP

摘要目的：通过检测角质形成细胞株HaCaT在不同浓度的槟榔碱刺激下，其生长增殖活性的变化，以及槟榔碱和细胞外钙离子浓度升高对HaCaT细胞S100A7mRNA表达的影响，进一步探讨OSF的发病机制。方法：应用不同浓度槟榔碱处理HaCaT细胞24小时，采用MTT法检测HaCaT细胞增殖活性的改变：采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测HaCaT在槟榔碱和细胞外钙离子浓度升高刺激后细胞中S100A7mRNA表达的变化。结果：(1)高浓度(80．320pg／m1)的槟榔碱抑制HaCaT细胞的增殖(PO．05)，80、160和320ug／ml的槟榔碱相对于未加入槟榔碱的对照组分别使细胞数量下降到89％、84％和61％，对细胞增殖的抑制分别为11％、16％和39％；而在相对较低的槟榔碱浓度(O一401．tg／m1)下未见对HaCaT细胞的增殖有明显抑制或促进作用(PO．05)。高浓度槟榔碱处理后的细胞可以见到明显的形态改变。(2)浓度为40．80pg／ml的槟榔碱轻度上调HaCaT细胞中S100A7mRNA的表达(Po．05)。1．0mM的细胞外钙离子处理1小时，不能使HaCaT细胞S100A7mRNA的表达升高，1．8mM的细胞外钙离子处理48小时，可以诱使HaCaT细胞S100A7mRNA的表达升高(PO．05)。结论：(1)较低浓度的槟榔碱对于HaCaT细胞的生长没有明显的抑制与促进作用，高浓度的槟榔碱能显著抑制HaCaT细胞的生长。槟榔碱对HaCaT细胞具有细胞毒性。(2)槟榔碱在一定浓度下可以诱导HaCaT细胞S100A7mRNA的表达增加。S100A7基因及其编码蛋白可能在口腔粘膜下纤维性变的发病中起了重要作用。(3)细胞外钙离子浓度的长时间升高可以诱导HaCaT细胞S100A7mRNA的表达增加。槟榔成分中的钙可能参与了13腔粘膜下纤维性变的发病。关键词：S100A7，炎症，口腔粘膜下纤维性变，HaCaT，RT-PCRⅡArecolineandextracellularcalciumionupregulateS100A7mRNAexpressioninhumankeratinocytesABSTRACTobjeetive：ToinvestigatetheeffectofarecolineandextracellularcalciumlevelsonthegrowthandexpressionofS100A7mRNAinhumankeratinocytes(HaCaTcells)，andtofurthergaininsightintothepathogenesisofOSF．Methods：Theeffectofa24一hourexposureofHaCaTtoarecolineofvariousconcertrationsonthegrowthwasmeasuredbyMTT，andRT-PCRwasusedfordetectingtheexpressionofS100A7mRNAinHaCaTafterarecolinetreamentfor24hoursandelevatedextracellularcalciumlevels．Ibsuits：(1)Arecolineathighconcertrations(80—320ug／m1)inhibitsthegrowthofHaCaT(PO．05)．AexposureofHaCaTto80，160and320lag／mlarecolineresultedin11％，16％and39％celldeath，respectively．Arecolineatconcertrationsbelow401．tg／mllackedbothcytotoxicitytoHaCaTandpromotingeffectongrowthofHaCaT(PO．05)．A24-hoursexposuretoArecolineathighconcertrationsleadtomarkedmorphouschangesofHaCaT．(2)ExposureofHaCaTtoArecolineatconcertrationsof40-80ug／mlslightlyelevatedS100A7mRNAexpression．Anhourexposureof111HaCaTto1．0mMextracellularcalciumioncannotelevateS100A7mRNAexpression，whilea48-hourexposureto1．8mMextracellularcalciumioncoudelevatedS100A7mRNAexpression(PO．05)．Conclusions：