第九章、核酸代谢(金山).pptVIP

第九章、核酸代谢 中心法则 一、DNA的半保留复制 二、大肠杆菌DNA复制需要的酶及蛋白因子 三、原核生物DNA的复制（大肠杆菌） 四、真核生物的DNA复制 五、逆转录（RNA指导的DNA合成） 六、DNA的损伤和修复 七、PCR(聚合酶链式反应)技术 一、DNA的半保留复制 二、参与大肠杆菌DNA辅助的酶及蛋白质因子 （二）E.coliDNA复制需要的酶和蛋白因子 1. DNA聚合酶: 2. 引物酶 3. 连接酶 4. 解链酶 5. 单链结合蛋白 6. 拓扑异构酶　 １、DNA聚合酶 5’至3 ’的聚合活性（ 5 ’ → 3 ’ ）：3’－OH对dNTP的α－磷酸进行亲核攻击，形成3 ’ ，5 ’ 磷酸二酯键。 2、引物酶： ３、连接酶 参与DNA复制的酶与蛋白因子总览图 三、原核生物DNA的复制（大肠杆菌） 1、复制的起始(initiation) ——复制起点处双链的解开，RNA引物的合成 2、复制的延长(elongation) ——DNA聚合酶III向RNA引物或延伸链的3’端添加dNTP，包括前导链的合成和滞后链的合成 3、复制的终止(termination)—— 滞后链的模板绕DNA聚合酶向后回折成环，复制叉上的DNA聚合酶III全酶同时合成前导链和滞后链。 3、复制的终止 总结：DNA复制的高保真因素 四、真核生物的DNA复制 1、真核生物DNA聚合酶 2、真核生物的DNA复制的过程 3、端粒的复制 3、端粒的复制 端粒（telomere ） 真核生物染色体末端的DNA重复序列。 总结：DNA复制的基本规律： 2、逆转录酶的性质 依赖于RNA的DNA聚合酶活性，DNA-RNA； 核糖核酸酶H的活性,水解杂交双链中的RNA； DNA指导的DNA聚合酶活性,DNA-DNA 　　DNA的合成为5’-3’方向，需要引物 逆转录的生物学意义 扩充了中心法则 对RNA病毒致癌机制的了解，对防治肿瘤提供了线索； 分子生物学和基因工程中常用的工具酶。 六、DNA的损伤、修复与突变 2、DNA损伤的修复 （1）光修复 紫外光照射可使相邻的两个嘧啶形成嘧啶二聚体； 光修复酶在400-500nm波长可见光激活下，可使二聚体解聚为单体状态，DNA完全恢复正常。 （2）切除修复 参与的酶有：核酸内切酶，D聚合酶，DNA连接酶 （3）重组修复 属于复制后的修复 突变：核酸水平上发生的永久性的，可遗传的变异 突变类型： 置换（点突变）： 插入（或缺失）：DNA链上插入或缺失一个或几个碱基 一、DNA指导的RNA合成 二、原核生物转录产物的加工 三、真核生物的转录 四、 RNA的复制 五、转录的选择性抑制 一、DNA指导的RNA合成 1.转录 2.模板链和编码链 3.转录的总反应 4. DNA指导的RNA 聚合酶 5.原核生物的转录过程 6.转录与复制的区别 7.转录的基本规律 启动子：RNA聚合酶识别，结合和开始转录的一段DNA序列。 转录因子：RNA聚合酶转录时需要的一些辅助因子(蛋白质) 。 终止子：提供转录终止信号的DNA序列。 终止因子：协助RNA聚合酶识别终止信号的辅助因子(蛋白质)。 2. DNA的编码链和模板链 模板链：基因上可作为模板转录成RNA的一条DNA链。（负链、无意义链）。 编码链：基因上不能作为模板转录成RNA的一条DNA链。（正链、有意义链）。 RNA产物和编码链之间只有U与T的区别； 　它们都与模板链反向平行，碱基互补； 染色体上各个基因的编码链不一定都在同一DNA单链上。即一条链上具有某些基因的模板链和另一些基因的非模板链。 不对称转录：对于一个特定的基因，双链DNA中仅有一条链被转录。 4、DNA指导的RNA聚合酶（转录酶） 大肠杆菌RNA聚合酶的组成及作用: 5、转录过程（原核生物） （1）转录的起始 σ因子辨认启动子，RNA聚合酶全酶结合到-35box上，形成闭合二元复合物； 当-10box，DNA双链部分解开，形成开放二元复合物； 开放的三元复合物（DNA－RNA－RNA聚合酶）； 在RNA合成了8～9nt后，σ因子解离，转录进入延伸阶段 （2）转录的延伸 σ亚基脱落，核心酶构象改变，沿模板链3’ →5’移动，碱基配对原则，RNA链以5’ →3’方向延伸。 RNA聚合酶不具备3’ →5’ 的外切酶活性，故转录的保真度不DNA复制低。 （3）转录的终止 7、转录的基本规律 二、原核生物转录产物的加工 3、 tRNA前体的加工 三、真核生物的转录 真核生物的RNA聚合酶 真核mRNA前体的加工 原核：mRNA大多一经转录即可直接进行翻译。 四、 RNA的复制 切开 切除 聚合 连接 切开 聚合 切除 连接 切除修复 核酸酶 DNA聚合酶 DNA连接酶 属于复制前的修复。