血清白蛋白的分离纯化及鉴定（一）盐析G25脱盐G75层析ppt课件.pptVIP

血清白蛋白分离与纯化 实验目的 1.了解血清蛋白质分离的一般方法 2.掌握盐析法、凝胶层析分离纯化白蛋白的方法 实验原理 血清中主要蛋白：白蛋白与球蛋白 正常人血清中总蛋白、白蛋白、球蛋白的量保持相对恒定；总蛋白60-80克/升，白蛋白为40-50克/升，球蛋白为20-30克/升。 盐析法 中性盐类能破坏溶液中蛋白分子表面的双电子层和水膜，从而使蛋白质从溶液中凝聚沉淀析出。 利用白蛋白和球蛋白在高浓度中性盐溶液中(常用硫酸铵)溶解度的差异而进行沉淀分离，此为盐析法。血清白蛋白在饱和硫酸铵溶液中沉淀析出，血清球蛋白在半饱和硫酸铵溶液中沉淀析出。 凝胶层析 1、凝胶层析也称凝胶过滤，是一类利用有一定孔径范围的多孔凝胶的层析技术，是一种分子筛效应。 2、当样品流经这类凝胶的固定相时，不同分子大小的各组分因进入网孔受阻滞的程度不同而以不同的速度通过层析柱，从而达到分离的目的。 实验步骤-硫酸铵盐析 取正常人血清2.0ml于小试管中，边摇边缓慢滴加饱和硫酸铵溶液2.0ml，混匀后于室温中放置10min，3000r／min离心10min。 用滴管小心吸出上层清液于另一试管中，作为纯化白蛋白之用。 凝胶柱G-25层析除盐 1、装柱：洗净的层析柱垂直夹于铁架上（有尼龙网孔的一头朝下），将底部夹紧，注入约2.0 ml的0.02 mol/L PH6.5 NH4Ac缓冲液。将G-25疑胶搅成悬浮状加入