6.2离子交换层析分离技术.pptVIP

* * 4．交换容量 交换容量是指离子交换剂与溶液中离子或离子化合物进行交换的能力。一般用总交换容量和有效交换容量表示。总交换容量和有效交换容量除与离子交换剂本身的性质有关外，前者并不受测定条件的影响，而后者却与测定条件有关。 (1)影响交换容量的因子 ①筛孔：有效交换容量与离子交换剂筛孔的直径以及分离物的分子量大小密切相关。当离子交换剂的交联度较低，并预先进行充分溶胀时，其筛孔会增大。这不仅可使大分子物质进入筛孔与交换剂的电荷基团进行交换，而且暴露出来的电荷基团对增加有效交换容量也是有益的。表4-5列出的数据表明，DEAE—Sephadex A-25交联度大、筛孔小，对分子量小的α-乳清白蛋白(M.W＝14000)的交换容量远比分子量大的铁蛋白(M.W＝440000)高。而DEAE-Sephadex A-50交联度小、筛孔大，膨胀度亦大，对α-乳清白蛋白的交换容量就相对降低，而对铁蛋白则相对增高。大孔径的交联琼脂糖和纤维素离子交换剂的交换容量情况与DEAE-Sephadex A-50相似。 ②离子强度：当溶液中的离子强度增大时，离子对交换剂上的束缚位点就会增加竞争作用，从而降低了交换剂的有效交换容量。这也就是平常使用的增大流动相离子强度，能洗脱束缚在交换剂上有效成分的道理所在。 ②pH值；交换容量与电荷基团的数量，或者说与溶液的pH值有密切关系。图4-6是几种离子交换剂的滴定曲线。从曲线看出，弱阴离子交换剂的交换容量是随着pH(＜其pK值＝值的下降(电荷基团的解离度增加)而增大的，而弱阳离子交换剂的交换容量是随着pH(＞其pK值)值的上升(电荷基团的解离度增加)而增大的。但是，带有强电荷基团的离子交换剂由于在任何pH值的溶液中部处于解离状态，所以交换容量基本与pH值变化无关。 (2)交换容量的测定 交换容量的测定方法是随着交换剂性质的变化而变化的。强酸型与强碱型离子交换剂是测定其解离盐的能力；弱酸型与弱碱型离子交换剂则是测定其中和酸碱的能力。具体测定方法是： 强酸型阳离子交换剂： 在测定交换容量前，先加酸溶液于一定量的交换剂中，使其转变成氢型(可交换离子全为H+)，然后用蒸馏水洗至中性，接着用5％NaCl溶液通过交换剂，直到流出液为中性。再用蒸馏水洗净，合并流出液，以标准NaOH溶液滴定流出液至甲基红终点，由交换剂所消耗的酸量来计算总交换容量。 中强酸型和弱酸型阳离子交换剂： 其交换容量也用氢型交换剂来测定。将一定体积的标准碱溶液通过适量的氢型交换剂后，用蒸馏水洗净，合并流出液，以标准酸溶液滴定至甲基红终点，由交换剂所消耗的碱量计算总交换容量。 强碱型阴离子交换剂： 将一定量的OH型交换剂用蒸馏水洗至接近中性后，用5％NaCl溶液通过交换剂直到流出液为中性，接着用蒸馏水洗净，合并流出液，以标准酸溶液滴定至甲基红终点，由交换剂所消耗的酸量计算总交换容量。 强碱型离子交换剂中有时也含弱碱性基团，测定这些基团的含量时，可取上述测定过交换容量的交换剂，令其通过一定体积的标准酸溶液，再用蒸馏水洗净，用标准碱溶液滴定流出液至甲基红终点，由交换剂消耗的酸量计算弱碱基团的含量。 中强碱型阴离子交换剂： 其交换容量分两步测定，先测定强碱性基团，再测定弱碱性基团。弱碱型阴离子交换剂：其交换容量系用上述测定强碱型阴离子交换剂之交换容量的方法进行。 * * * * * * * * 如果被分离物质为两性离子，则一般应根据其在稳定的pH范围内所带电荷来选择交换剂。例如，图4-11是假设一蛋白质的等电点为5 。若该物质在pH5-8稳定时，则应选择阴离子交换剂；若该物质在pH5以下稳定时，则可选择阳离子交换剂。 * * * * * * * * * * * * * * * * * * 二、缓冲液的选择 1、缓冲液pH的选择 2、缓冲液离子组成的选择 3、缓冲液离子强度的选择 1、缓冲液pH的选择 ①要求： 起始缓冲液能使样品中有效成分与离子交换剂结合，洗脱液能使有效成分从离子交换剂上解离下来。 ②PH值与目标物pI的关系（pH=pI±1） ③选择性吸附　 ④选用弱阳离子交换剂时，pH高于其pK； 选用弱阴离子交换剂时，pH低于其pK； 2、缓冲液离子组成的选择 ①缓冲液离子的pK值要接近所用的pH， ②采用阳离子交换剂应选用阴离子缓冲液， 　　如：磷酸盐、醋酸盐、柠檬酸盐 ③采用阴离子交换剂应选用阳离子缓冲液， 　　如：Tris ④缓冲液离子不影响被分离物的活性、测定、溶解度。 3、缓冲液离子强度的选择 ①起始缓冲液能使样品中有效成分与离子交换剂结合，一般小于0.1mol/L。 ②洗脱液能使有效成分从离子交换剂上解离下来，一般0.15mol/L（或采用pH洗脱）。