骨桥蛋白对体外培养人oa软骨细胞mmp-1影响的实验研究-experimental study on the effect of osteopontin on mmp - 1 in human oa chondrocytes cultured in vitro.docxVIP

骨桥蛋白对体外培养人 OA 软骨细胞 MMP-1 影响的实验研究中文摘要 研究背景和目的：随着我国老龄化社会的到来，越来越多的人罹患骨关节炎疾病。因此，骨性关节炎的 治疗已成为现代医学研究的重点。骨关节炎的发病机制涉及多方面，其中基质金属蛋白酶-1(MMP-1)对软骨细胞外基质（ECM）的降解起着重要作用。 骨桥蛋白（OPN）是一种糖基化磷酸蛋白，广泛存在人体组织中，对骨代谢、炎症反应、肿瘤发生转移及免疫调节等生理病理过程有重要意义。在骨关节炎患者的关节液，滑 膜，软骨中均发现 OPN 含量较正常人明显增高。但又有研究显示，敲除 OA 大鼠 OPN 基 因后，可导致 OA 模型病变加剧，提示 OPN 在骨性关节炎的发病过程中起着重要作用。本研究拟通过体外培养骨性关节炎患者的软骨细胞，检测不同浓度 OPN 对软骨细胞 MMP-1 的影响。初步探讨 OPN 在骨关节炎中的作用，为将来靶向治疗骨关节炎提供一种 新的思路。第一部分软骨细胞的分离及鉴定 目的分离、鉴定软骨细胞。方法运用两步酶消法将全膝关节置换术后的软骨组织分离，消化，培养。然后制成细胞 爬片，通过Ⅱ型胶原免疫组化染色检测细胞。结果 倒置相差显微镜下观察细胞形态正常，呈椭圆形，台盼蓝染色存活率高；细胞爬片 Ⅱ型胶原免疫组化染色细胞胞浆及周围有黄棕色颗粒，证实为Ⅱ型胶原，具有软骨细胞表 型特征。结论 应用两步酶消法，分离培养的 OA 软骨细胞可满足实验要求。第二部分不同浓度 OPN 对 OA 软骨细胞 MMP-1 的影响 目的探讨不同溶度 OPN 对 OA 软骨细胞 MMP-1 的影响方法1、培养 OA 患者的软骨细胞；2、取对数生长期的第二代 OA 软骨细胞，分为 4 组： 1.空白对照组；2.OPN 1ng/ml 组；3. OPN 2ng/ml 组；4. OPN 4ng/ml 组。48 小时后收集 OA 软骨细胞检测 MMP-1 mRNA 的相对表达量和 MMP-1 蛋白的相对表达量；收集细胞上清液I检测 MMP-1 蛋白的表达量。结果 当 OPN 溶度为 1ng/ml，2ng/ml，4ng/ml 时均比空白对照组 MMP-1 表达低，且差异 有统计学意义（p0.05）；当 OPN 溶度为 4ng/ml 时较其他 3 组 MMP-1 的表达水平均低， 且差异有统计学意义（p0.05）。结论 OPN 可以减低 OA 软骨细胞 MMP-1 的表达，且在一定范围内与 OPN 的浓度呈正相 关。关键词 骨关节炎、软骨细胞、骨桥蛋白、基质金属蛋白酶-1IIBackground and ObjectivesABSTRACTWith the advent of an aging society in our country, more and more people are suffering from osteoarthritis disease. Therefore, the treatment of osteoarthritis has become the focus of modern medical research. Osteoarthritis pathogenesis involves many aspects, including the matrix metalloproteinase 1 (MMP 1) on the degradation of cartilage extracellular matrix (ECM) plays an important role.Osteopontin (OPN) is a kind of protein glycosylation phosphoric acid, widely exists in human tissue.It is very important for bone metabolism, inflammation, tumor metastasis and immune regulation. Review of research shows that in the joint fluid of patients with osteoarthritis, synovial membrane, cartilage were found the OPN is significantly higher than normal.But studies also have found that OPN gene knockout OA rats, which can lead to OA model lesions, prompt OPN in plays an important role in the p