固定酶的苯乙烯整体柱微芯片研究系统分析-systematic analysis of styrene monolithic column microchip with immobilized enzyme.docxVIP

重庆大重庆大学硕士学位论文英文摘要 PAGE PAGE VIpracticality.Keyword: Polystyrene monolithic column，Enzyme immobilization，Micro-fluidic analytical system，Chemiluminescence重庆大重庆大学硕士学位论文目 录目 录中文摘要I英文摘要 II1 绪 论 11.1 微流控芯片酶反应分析系统 11.1.1 微流控芯片通道壁固定酶反应分析系统 21.1.2 微流控芯片上微珠固定酶反应分析系统 31.1.3 微流控芯片上膜固定酶反应分析系统 41.1.4 微流控芯片上凝胶固定酶反应分析系统 51.1.5 微流控芯片上聚合物材料固定酶反应分析系统 51.2 微流控芯片分析系统中整体柱分离富集 71.3 课题研究意义和目标 82 微芯片上固定酶聚苯乙烯整体柱材料的制备及改性 102.1 引言 102.1.1 聚苯乙烯整体柱的制备原理 102.1.2 聚苯乙烯整体柱的改性原理 112.2 实验部分 122.2.1 药品及试剂 122.2.2 仪器 122.2.3 实验内容 122.3 结果与讨论 132.3.1 引发条件对聚苯乙烯整体柱制备的影响 132.3.2 磺化反应时间对聚苯乙烯整体柱改性的影响 142.4 本章小结 153 微芯片上固定酶聚苯乙烯整体柱材料的表征及性能分析 173.1 引言 173.2 实验部分 173.2.1 药品及试剂 173.2.2 仪器 173.2.3 实验内容 183.3 结果与讨论 193.3.1 孔隙率的测定 193.3.2 比表面的测定 193.3.3 扫描电镜测试 203.3.4 红外光谱测试 203.3.5 柱机械稳定性测试 213.3.6 柱最大吸附量测试 223.4 本章小结 244 聚苯乙烯整体柱上 GOD 酶固定化效率测试 254.1 引言 254.2 对苯醌紫外检测原理 254.3 实验部分 274.3.1 药品及试剂 274.3.2 仪器 274.3.3 实验内容 274.4 结果与讨论 284.4.1 波长对检测的影响 284.4.2 对苯醌溶液浓度对检测的影响 304.4.3 GOD 酶苯乙烯整体柱材料上的固定化效率测试 314.5 本章小结 335 固定 HRP 酶的苯乙烯整体柱芯片分析系统应用测试 355.1 引言 355.2 化学发光测试原理 355.3 固定酶整体柱微反应芯片－化学发光检测方法 365.4 实验部分 375.4.1 药品及试剂 375.4.2 仪器 375.4.3 实验内容 375.5 结果与讨论 395.5.1 微芯片的制作以及聚苯乙烯整体柱的原位聚合 395.5.2 微芯片内聚苯乙烯整体柱上 HRP 酶的固定 405.5.3 化学发光检测参数的确定 415.5.4 固定 HRP 酶整体柱微反应芯片－化学发光检测方法应用示例 435.6 本章小结 446 结果与展望 456.1 结论 456.2 后续研究工作的展望 46致 谢 47参考文献 48附 录 52重庆大重庆大学硕士学位论文1 绪论 PAGE PAGE 101 绪 论微流控芯片分析系统，在实际的测量中需要结合多种样品分析模式，从20世 纪90年代正式提出u-TAS或者称lab-on-chip以来，在最近得到相当多的关注。实现 u-TAS的第一个实例是把毛细管电泳（CE）引入到微芯片上。但是相对的，除了 CE以外的其他模式的引入却发展较慢，其中包括酶反应[1]、免疫反应[2]、荧光分子 标记[3]、PCR反应[4]等模式的引入，在实现微芯片体系在生物化学分析、临床检测、 药物筛选等领域的巨大发展潜力方面，还是具有其自身的优越性的。酶是生物催化剂，它们通过降低表面活化能来加快反应的过程。任何一种酶 只能催化一种或一类化学反应，每摩尔酶催化剂每秒可分解大于 1.0×107mol 的 H2O2,而且酶催化作用一般都在常温、常压、pH 接近中性的条件下进行。因此，与 其他的非酶催化剂相比，酶作为催化剂具有专一性强、催化效率高和作用条件温 和等特点，酶被广泛应用于化学分析中，包括常规的流动注射分析和传统的毛细 管电泳体系。但游离酶稳定性差、易失活、不能重复使用,并且反应后混入产品,纯 化困难,且分离和提纯酶的技术复杂,代价昂贵,这样限制了其广泛应用。而固定化酶 却具有Ⅰ.易于将酶与底物及产物分离，因而产物相对容易提纯；Ⅱ.酶能够重复利 用，使用效率提高，成本低；Ⅲ.大多数情况下可以提高酶的稳定性；Ⅳ.可以增加 产物的收率，提高产物质量；Ⅴ.有利于实现管