盾叶薯蓣药材甾体总皂苷成分HPLC—ELSD指纹图谱研究.docVIP

盾叶薯蓣药材甾体总皂苷成分HPLC—ELSD指纹图谱研究 　　[摘要]建立不同产地盾叶薯蓣药材中甾体总皂苷成分HPLC-ELSD指纹图谱的方法。采用Welchrom C18（4.6 mm ×250 mm，5 μm）色谱柱，乙腈（A）-水（B） 作为流动相，梯度洗脱；柱温室温；体积流速1.0 mL·min-1；蒸发光散射检测器条件：漂移管温度90.0 ℃，载气（N2）流速2.8 L·min-1；进样体积10 μL。通过检测10个批次盾叶薯蓣药材，首次建立了盾叶薯蓣甾体总皂苷成分HPLC-ELSD指纹图谱的共有模式，确定了25共有峰，并利用对照品对照法对其中的10个共有峰进行了成分指认。以共有模式对10批药材进行相似度评价，其相似度全部大于0.80。该方法准确、可靠、重复性好，为全面评价和控制盾叶薯蓣药材的质量提供了科学依据。 　　[关键词]盾叶薯蓣；甾体总皂苷；HPLC-ELSD；指纹图谱 　　盾叶薯蓣Dioscorea zingiberensis C.H.Wright又名黄姜、火头根、枕头根[1-2]，为薯蓣科薯蓣属多年生草??缠绕性植物，为我国特有种[3-5]。其根茎中的薯蓣皂苷元是合成避孕药、甾体激素类药物的重要原料，含量高达16.15%，是目前世界上最好的激素类来源的天然药物[6-7]。盾叶薯蓣性味甘、苦、凉[8]，具有清肺止咳、利湿通淋、通络止痛、解毒消肿等功效，民间用于治疗皮肤急性化脓性感染、软组织损伤、蜂蜇、虫咬及各种外科炎症[9-10]。盾叶薯蓣根茎中的主要活性成分为皂苷类化合物，具有镇咳、平喘、降低胆固醇、预防动脉硬化、抗癌等作用[11-13]，其在盾叶薯蓣中质量的好与坏，直接影响着盾叶薯蓣的药理作用。 　　目前盾叶薯蓣的质量控制手段主要采用高效液相色谱法对已知化合物（如薯蓣皂苷、纤细皂苷、盾叶新苷和黄姜素A等）进行含量测定[14-17]，仍采用了对化学药品质量控制的模式，众所周知，单一或少数几个指标性成分的含量测定往往难以反映中药整体质量。由于受到天气、气候和产地等各种因素的影响，盾叶薯蓣中甾体总皂苷活性成分的含量会有较显著的差异，从而影响其质量。为了更好地控制盾叶薯蓣的质量，本实验首次建立了盾叶薯蓣中甾体总皂苷HPLC-ELSD指纹图谱分析的方法[18]，以期为盾叶薯蓣药材的药效和质量控制等方面提供理论基础和实验依据。 　　1材料 　　1.1仪器 　　Waters 2695型高效液相色谱仪（包括四元泵、真空在线脱气机、自动进样器、柱温箱和Empower色谱工作站）；Alltech 2000E型蒸发光散射检测器（ELSD，美国Alltech公司）； SE-96自动纯水蒸馏器；KQ-100DE型数控超声波清洗器（昆山市超市仪器有限公司）；Sartorius BP211D型电子天平（德国赛多利斯公司）；中药指纹图谱相似度评价系统2004版A（国家药典委员会）。乙腈为色谱纯（德国默克公司），水为双蒸水，其余试剂均为分析纯。 　　1.2试药 　　共有峰归属所用对照品为26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-（25R）-呋甾烷-5-烯-3β，22ζ，26-三醇-3-O-[β-D-吡喃葡萄糖基-（1→3）-α-L-吡喃鼠李糖基-（1→2）]-β-D-吡喃葡萄糖苷（化合物A），甲基原薯蓣皂苷（化合物B），26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-（25R）-呋甾烷-5，20（22）-双烯-3β，26-二醇-3-O-{α-L-吡喃鼠李糖基-（1→4）-[β-D-吡喃葡萄糖基-（1→3）-β-D-吡喃葡萄糖基-（1→2）]}-β-D-吡喃葡萄糖苷（化合物C），黄姜素A（化合物D），26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-（25R）-呋甾烷-5-烯-3β，22ζ，26-三醇-3-O-[α-L-吡喃鼠李糖基-（1→4）]-β-D-吡喃葡萄糖苷（化合物E），盾叶新苷（化合物F），三角叶薯蓣皂苷（化合物G），薯蓣皂苷（化合物H），纤细皂苷（化合物I），β-胡萝卜苷（化合物J）均由本实验室分离获得（采用13C-NMR和MS等光谱学方法确定其结构，并经HPLC-ELSD峰面积归一化法测得其纯度均大于95%）。试验用不同盾叶薯蓣药材采集自陕西省不同县区，经西北大学生命科学学院王亚洲副教授鉴定为薯蓣科薯蓣属盾叶薯蓣D. zingiberensis的干燥根茎，10批次药材来源见表1。 　　2方法和结果 　　2.1色谱条件 Welchrom C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），采用乙腈（A）-水（B）梯度洗脱（0～5 min，25%～30%A；5～20 min，30%～30%A；20～35 min，30%～35%A；35～45 min，35%～47%A；45～47 min，47%～60%A；47～60 min，60%～60%A；6