Twist和N―cadherin在骨肉瘤组织中表达及相关性研究.docVIP

Twist和N―cadherin在骨肉瘤组织中表达及相关性研究 　　【摘 要】目的：探讨转录因子Twist和神经-钙黏附蛋白（N-cadherin）在骨肉瘤组织中的表达及其相互间的关系。方法：采用免疫组化SP法检测60例骨肉瘤患者和20例骨软骨瘤患者组织中Twist和N-cadherin的表达。结果：骨肉瘤组的Twist表达的阳性率和阳性表达强度明显高于骨软骨瘤组，而N-cadherin表达的阳性率和阳性表达强度明显降低，差异有统计学意义，P　　【关键词】骨肉瘤；Twist；神经-钙黏附蛋白 　　【中图分类号】R738 【文献标识码】A 【文章编号】1004―7484（2013）09―0006―02 　　骨肉瘤是临床上较常见的一种骨骼系统恶性肿瘤，具有恶性程度高、生长迅速、病情进展快和预后差等特点，严重危害人类健康。现有的以截肢术为主的各种诊疗措施均难以提高骨肉瘤的临床疗效和改善患者预后[1]，因此揭示骨肉瘤发病的分子机制，对骨肉瘤的诊断、治疗和预后具有重要的临床意义。Twist是一种凋亡抑制蛋白，与上皮-间质转化（EMT）和恶性肿瘤生长、侵袭、转移和耐药密切相关[2]。神经-钙黏附蛋白（N-cadherin）是经典型钙黏附家族成员之一，其主要生物学作用为介导间叶细胞间的黏附和迁移。近年来研究发现，N-cadherin在人类癌细胞中表达上调，与肿瘤的浸润和转移有着密切的联系[3]。目前国内外有关骨肉瘤组织中Twist和N-cadherin的表达及相关性研究较少。作者采用免疫组织化学技术检测60例骨肉瘤患者组织中Twist和N-cadherin的表达以及其相互间关系，旨在探讨 Twist 与 E-cadherin 在骨肉瘤发生发展过程中的生物学意义，以期为进一步阐明骨肉瘤的发病机制以及早期诊断、基因治疗和预后评估提供理论依据。 　　1对象与方法 　　1.1 研究对象 选取2011年5月～2013年5月在我院骨外科行截肢肿瘤切除或手术切除的骨肉瘤患者60例。所有入选病例均由两位高职称病理学医生穿刺活检确诊核实。入选病例术前均未行化疗，且未发现转移。其中男43例，女17例，发病年龄13～52（28.5±14.6）岁；组织学类型：成骨细胞型37例，成软骨型14例，成纤维型5例，特殊类型4例。按骨肉瘤Enneking分期： I期17例，Ⅱ期40例，Ⅲ期3例。发病部位：胫骨23例，股骨26例，肱骨上端8例，腓骨3例。另取同期年龄和性别相匹配骨软骨瘤患者手术切除的组织标本20例作为对照。 　　1.2检测方法 （1）标本制作 新鲜手术标本采用10%福尔马林固定 24 小时。固定后用进口脱钙液脱钙，再常规脱水、透明和石蜡包埋，4?m 连续厚切片，每例标本切片3张，两张用于Twist 和 N-cadherin免疫组织化学染色，另一张用于 HE 染色；（2）Twist 和 N-cadherin检测 采用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶法（SP）检测Twist和N-cadherin的表达。兔抗人 Twist多克隆抗体购自美国Santa Cruz公司，鼠抗人N-cadherin单克隆抗体、超敏免疫组化染色试剂盒、二氨基联苯胺（DAB）染色剂和抗体稀释液等购自北京中杉金桥生物技术有限公司。检测设阴性和阳性对照，并严格按试剂盒说明书进行操作；（3）结果判定 在 未知病理与临床资料情况下独立观察。Twist 阳性染色着色呈黄色、棕黄色或棕褐色，主要位于胞质，少数位于胞核。高倍镜下随机选取 10 个非重叠视野，按阳性细胞所占比例评估表达强弱：背景均匀淡黄色或为阴性细胞未着色为阴性（-），0～25%为弱阳性（+），25%～50%阳性（++），大于 50%为强阳性（+++）。N-cadherin阳性着色呈浅黄色、棕黄色或棕褐色，主要位于胞质，少数位于胞膜。按阳性细胞所占比例评估表达强弱：无着色为阴性（-），0～30%为弱阳性（+），30%～60%为阳性（++），大于60%为强阳性（+++）。 　　1.3统计学处理 采用 SPSS 15.0软件进行数据处理。应用 Chi-square 和 Fisher’s 确切法进行 χ2检验比较组间Twist 和 N-cadherin表达阳性率。应用Mann-Whitney U 法比较组间Twist 和 N-cadherin表达强弱程度。应用 Spearman 等级相关非参数检验分析 Twist 和 E-cadherin 之间的相关性。以 α=0.05 作为检验水准。 　　2 结果 　　2.1 骨肉瘤组和骨软骨瘤组的Twist和N-cadherin表达情况比较 骨肉瘤组的Twist表达的阳性率为81.7%（49/60），明显高于骨软骨瘤组的20.0%（4/20），P 　　综上所述，骨肉瘤组织中Twist和N-cadher