莲籽通心粉中莲心总碱大孔树脂纯化工艺研究.docVIP

莲籽通心粉中莲心总碱大孔树脂纯化工艺研究 　　摘 要：选用乙醇二次回流法粗提莲籽通心粉中的莲心总碱，粗提物通过大孔树脂柱层析的吸附与洗脱进一步分离纯化。通过研究得出，D101大孔树脂较适宜进行莲心总碱的纯化，其最佳的吸附条件为：上样液浓度10.00 mg/mL、pH 值9、体积30 mL（0.43 BV）、流速1 mL/min，此工艺得到最大吸附量为9.55 mg/g；其最佳的洗脱条件为：乙醇浓度70%、pH值2、体积4 BV、流速1.4 mL/min，洗脱率达89.93%，经纯化后最终得率为64.39%。 　　关键词：莲籽通心粉；莲心总碱；大孔树脂；纯化 　　中图分类号：TS235.9 文献标识码：A 文章编号：1001-3547（2013）18-0194-05 　　莲籽的加工一般要经过干燥、分级、去壳、除皮去心等工序，莲籽心被直接扔掉，造成了资源的极大浪费和环境污染。因此开发利用莲籽副产品，对提高莲籽的经济效益、充分利用资源和保护环境都有着重要的实际意义[2]。 　　副产物莲籽通心粉的主要成分是莲籽心。莲籽心具有清心理气火、固精血之功效。莲籽心中主要含有莲心碱（Liensinine）、异莲心碱（Isoliensinine）、甲基莲心碱（Neferine）等生物碱，这3种同属双苄基异喹啉类生莲心碱系[3～5]。研究表明，莲心碱有降压、防治心律失常和心肌缺血的作用[6]，莲心碱具有很高的医疗价值和较强的抗氧化性能，已成为现代中医药研究的热点之一，临床应用前景广阔[7]。从莲籽通心粉中提取莲籽碱具有资源廉价丰富和环保的优点。本研究选用乙醇二次回流法粗提莲籽通心粉中的莲心总碱，通过考察上样液的浓度、体积、pH值以及优化洗脱液浓度、体积、pH值，确定了较佳的大孔树脂柱纯化莲心碱的工艺，为从莲籽加工副产物通心粉中提取莲心碱的工业化加工奠定理论基础。 　　1 材料与方法 　　1.1 试验材料 　　莲籽通心粉由湖北省洪湖晨光实业有限公司提供；原料预处理，10目筛初筛，初筛物于 55℃烘干，粉碎，过40目筛，待用。 　　1.2 试验方法 　　①莲心总碱的含量测定 a.标准曲线的制备。准确称取甲基莲心碱标准品粉末5 mg，于5 mL容量瓶中，用0.1 mol/L盐酸溶解并定容至刻度、摇匀。分别吸取0.15、0.20、0.25、0.30、0.35、0.40、0.45、0.50 mL于10 mL 容量瓶中，用0.1 mol/L盐酸定容至刻度，然后分别于282 nm波长处测定吸光度。以 　　0.1 mol/L盐酸为空白参比，以吸光度（A）为纵坐标，甲基莲心碱的溶度（C）为横坐标（C），绘制标准曲线（见图1）。 　　b.莲心总碱含量的测定。准确称取粗提莲心碱冻干品黄色粉末0.1 g于100 mL容量瓶中，用0.1 mol/L盐酸溶解并定容、摇匀。各取定容液1 mL于10 mL量瓶，用0.1 mol/L盐酸溶解并定容至刻度、摇匀，备用。以0.1 mol/L盐酸为空白参比，于282 nm波长处测定吸收度，换算得到生物总碱浓度，再根据下式计算样品中莲心总碱的含量： 　　②莲心生物碱的提取 称取一定量预处理的原料，置于圆底烧瓶中，分2次进行乙醇回流提取，第一次用与原料质量比为10∶1的90%乙醇，在60℃下回流提取60 min，抽滤收集提取液；再加入与第一次提取同样体积的90%乙醇溶液进行第二次提取，时间为45 min，将2次提取液合并储存，备用，即得莲心生物碱提取液[8]。将提取液旋转蒸发至无乙醇，移入分液漏斗，静置两昼夜分层分离。将分离物冷冻干燥为粗提莲心碱固体粉末，备用。 　　③大孔吸附树脂的选择 将0.1 g粗提莲心碱定容到100 mL，调节pH值为10；分别称取预处理过的大孔吸附树脂D101和AB-8各1 g，并置于100 mL锥形瓶中，再加入上述溶液20 mL，在室温下静置24 h，取下清液测定其中总生物碱含量，计算各树脂的静态吸附量。通过比较2种树脂的比吸附量，选择合适的树脂。 　　④树脂吸附条件优化试验 a.上样液浓度对吸附效果的影响。称取经预处理的D101干树脂22 g，湿法装柱，将粗提莲心碱冻干品配成浓度2.5、4.5、5.5、7.5、10.0、12.5 mg/mL的上样液。取pH值为10的上样液体积30 mL（0.425 BV），用恒流泵以1 mL/min流速上柱从树脂上方流下，收集流出液；静置2 h，使用超纯水水洗除杂至紫外检测仪数显值在A≤0.080，并收集水洗液。用紫外可见分光光度计在282 nm处测定吸光度，根据公式（2）得到D101吸附树脂对莲心总碱的比吸附量。 　　b.上样液的体积对吸附效果的影响。称取经预处理的D101干树脂22 g，湿法装柱。上样液的浓度选取1.2④a中最佳浓度，按10、20、30、40、50、60、7