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金针菇液体菌种培养基及培养条件优化 　　摘 要：液体菌种的应用是金针菇工厂化生产的关键技术和发展趋势。本研究以金针菇21作为供试菌株，通过摇瓶培养，比较了不同碳源和氮源对液体菌种质量的影响，结果发现，玉米粉为最佳碳源，麸皮为最佳氮源；通过正交试验对培养条件进行优化，结果显示，摇床转速150 r/min、装液量60 mL（三角瓶，250 mL容量）、接种量12%（V/V）、培养温度22℃时所得液体菌种质量最优，菌丝干质量达1.821 5 g/100 mL。栽培试验结果显示，菌龄5 d的液体菌种最适合栽培应用，栽培周期比使用固体菌种短，产量也高约5.8%。 　　关键词：金针菇；液体菌种；培养基；培养条件；优化 　　中图分类号：S646.1+5 文献 　　金针菇（Flammulina velutipes）是一种优质食用菌，富含蛋白质、氨基酸、维生素、矿质元素等多种营养物质[1]，以及朴菇素（Flammutn）、蒜菇素、金针菇原素（Flamn）等功能活性成分，具有抗肿瘤、调节免疫力、促进智力发育、护肝等作用[2]，早已成为人们熟知的保健食品。随着技术的革新和国内外市场需求的增长，金针菇生产方式已由传统作坊式、季节性生产，向设施化、工厂化生产方式转变[3]。作为金针菇工厂化栽培的关键技术之一，液体菌种具有生产周期短、接种便利、菌丝分散性好、萌发点多、生长快、成品率高等优点，液体菌种的应用已成为食用菌菌种及规模化、工厂化生产的发展趋势[4]。本研究采用液体摇瓶培养，对金针菇液体菌种的培养基和培养条件进行了优化，以期为金针菇栽培技术的提升提供科学依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 试验菌株 　　金针菇21，购自华中农业大学菌种实验中心。 　　1.2 培养基 　　①碳源筛选培养基 在基础培养基（蛋白胨1%，KH2PO4 0.1%，MgSO4 0.05%，维生素B1 1 mg/L） 中，分别加入2%的葡萄糖、蔗糖、可溶性淀粉、玉米粉4种碳源，121～126℃灭菌20 min，冷却备用。 　　②氮源筛选培养基 在基础培养基（葡萄糖2%，KH2PO4 0.1%，MgSO4 0.05%，维生素B1 1 mg/L） 中，分别加入2%的蛋白胨、酵母膏、麸皮3种氮源，灭菌，备用。 　　③培养条件优化培养基 玉米粉2%、麸皮1%、酵母粉0.5%、葡萄糖1%、KH2PO4 0.1%、MgSO4 0.05%、CaCO3 0.2%、维生素B1 1 mg/L。 　　④固体菌种培养基 小麦98%、白糖1%、石膏1%。小麦在清水中浸泡6～8 h，吸足水分，然后煮熟（不开粒），捞出沥干水，加入石膏粉、白糖拌匀，分装瓶中，灭菌，备用。 　　⑤栽培培养基 棉籽壳培养基（干料）：棉籽壳78%、麸皮20%、蔗糖1%、CaCO3 1%，加水搅拌至含水量60%，装袋（每袋折合干料300 g），灭菌，冷却待用。 　　1.3 菌种活化 　　菌种斜面接种到PDA平板，25℃恒温培养8 d，备用。 　　1.4 碳源、氮源的筛选 　　每种不同培养基设置3个重复，用直径0.2 cm的打孔器在活化的菌种平板上打孔，摇瓶容量250 mL，装液量70 mL，接活化菌种5块，25℃静置24 h后，150 r/min摇瓶培养5 d，观察菌丝球形态，测定菌丝体生物量。 　　1.5 菌丝体生物量测定 　　取50 mL摇匀的培养液，过滤收集菌丝，蒸馏水洗涤至水变清后，将菌丝球置于恒重过的定性滤纸之上，于干燥箱60℃烘至恒重后称量[5]。 　　1.6 液体菌种培养条件的优化 　　①一级种子的制备 将PDA活化的菌种经打孔后接种到液体培养基，恒温25℃，150 r/min条件下培养2 d，作为种子备用。 　　②摇瓶发酵条件的优化 三角瓶容量250 mL，接种上述种子液进行摇瓶发酵，根据已有报道[5～7]，以摇床转速、装液量、接种量及培养温度为4个因素，采用L9（34）正交试验设计，详见表1，共培养 　　5 d，以菌丝体生物量为考察指标，进行培养条件优化，获得最佳摇瓶发酵培养条件。 　　1.7 最佳接种菌龄的确定 　　发酵培养基在最优条件下制备液体菌种，菌龄分别设4、5、6 d三组，经轻微绞碎后，接种到棉籽壳培养基，每组20袋，观察菌丝长满所耗的时间及菌丝的生长状况。 　　1.8 固体菌种的制备 　　将活化好的PDA菌种平板接种到麦粒菌种培养基，在25℃、相对湿度75%左右条件下培养至满袋后，继续培养1周，待用。 　　1.9 出菇试验 　　分别将固体和液体菌种（菌龄5 d）接种10 g（或10 mL）到棉籽壳培养基中，各50袋，24℃、相对湿度75%左右条件下培养至满袋，继续1周后转入13～14℃菇房，相对湿度85%～90%，出菇两茬[8]，记录长满、现蕾时间及鲜菇产量，计算生物学效率，生物学效率（%）=子实体