荆芥防风药对HPLC特征图谱研究.docVIP

荆芥防风药对HPLC特征图谱研究 　　[摘要] 该实验采用高效液相色谱法，Agilent Extend-C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相0.5‰三氟乙酸-乙腈，梯度洗脱，建立了不同产地及批号的荆芥防风药对的特征图谱，标定了12个共有特征峰，并得到了荆芥防风药对的对照特征图谱。该法简便，准确，重复性好，可作为该药对的质量控制依据之一。 　　[关键词] 荆芥；防风；药对；特征图谱 　　荆芥为唇形科植物荆芥Schizonepeta tenuifolia Briq.的干燥地上部分，味辛，性温，入肺、肝经，具有解表散风、透疹、消疮之功效。防风为伞形科植物防风Saposhnikovia divaricata （Turcz.） Schischk.的干燥根，味辛、甘，性微温，入膀胱、肝、脾经，具有祛风解表、胜湿止痛、止痉之功效[1]。中医古方荆防散，由荆芥、防风组成，名曰荆防散。《本草求真》曰：“荆芥……不似防风气不轻扬，驱风之必入人骨肉也，是以宜散风邪，用以防风之必兼用荆芥者，以其能入肌肤宣散故耳”。二者配为药对，相须为用，并走于上，发散风寒，祛风胜湿之力增强，然发汗力较缓，常用于外感风寒、发热恶寒、头痛身痛[2-3]，临床极为常用。临床上单独使用荆防散或以此为君药的方剂，如消风散、驱风一字散等用于治疗风邪所致的疾病，如瘙痒风疹、风盛目痒等[4-5]；也有研究者以荆芥、防风为方，采用现代制剂工艺制得荆防抗感泡腾片，用于流感病毒的治疗中[6]。现代药理研究证明，该药对具有相似的药理作用，两者均有解热、镇痛、镇静、抗炎、抗菌、抗病毒、抗过敏、抗惊厥、增强免疫功能的作用[7-10]。然而对于该药对的质量控制尚未见报道，本实验采用高效液相色谱法[11]，运用特征图谱技术对荆芥防风药对进行质量控制，以期保证临床用药疗效。 　　1 材料 　　Waters 2695高效液相色谱系统；Waters Empower Pro 色谱工作站（美国沃特斯公司）；赛多利斯电子天平（d=0.01 mg，BP211D，赛多利斯科学仪器（北京）有限公司）；FA1104N电子天平（d=0.1 mg，上海精密科学仪器有限公司）；KQ-500B超声清洗仪；高速万能粉碎机（天津市泰斯特仪器有限公司）；优普特实验室超纯水器。 　　升麻素苷，5-O-甲基维斯拉米醇苷（南京泽朗植提医药科技有限公司，规格均为98%）；橙皮苷（中国食品药品检定研究院，批号110721-200211，供含量测定用）；胡薄荷酮[R-（+）-pulegone，98%，Sigma-Aldrich 公司]；乙腈（色谱纯，河北杜克化学科技有限公司）；三氟乙酸（色谱级，Aladdin Chemistry公司）；甲醇（色谱纯，江苏汉邦科技有限公司）；超纯水。 　　荆芥、防风样品各11批，分别打粉，过2号筛。产地、批号及两两配伍编号见表1。 　　2 方法与结果 　　2.1 供试品溶液的制备 　　取荆芥、防风粉末各1 g，精密称定，置50 mL具塞锥形瓶中，加甲醇20 mL，超声处理30 min，取出，放冷，滤过，加甲醇适量洗涤2次，合并滤液和洗液，转移至25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，0.45 μm微孔滤膜过滤，即得供试品溶液。 　　2.2 对照品溶液的制备 　　精密称定升麻素苷1.30 mg和5-O-甲基维斯拉米醇苷1.54 mg，分别置10 mL量瓶中，用0.5‰三氟乙酸-乙腈混合液（1∶1）溶解至刻度，摇匀，即得；精密称定橙皮苷1.55 mg和胡薄荷酮1.78 mg，分别置于10 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。 　　2.3 色谱条件 　　Agilent Extend-C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相0.5‰三氟乙酸（A）-乙腈（B），梯度洗脱，0～40 min，95%～60% A；40～60 min，60%～40% A；60～61 min，40%～95% A；61～65 min，95% A。体积流量1.0 mL?min-1；柱温30 ℃；检测波长280 nm；进样量10 μL。 　　2.4 方法学考察 　　2.4.1 精密度试验 取编号为130616-1的供试品溶液，按上述色谱条件连续进样6针，每次进样10 μL，记录各共有峰的保留时间和峰面积。以4号峰的保留时间和峰面积为参照，计算各共有峰的相对保留时间、相对峰面积及RSD。相对保留时间的RSD均在0.030%～1.3%，相对峰面积的RSD均在0.99%～2.8%，证明仪器精密度良好。 　　2.4.2 重复性试验 按2.1项下所述方法平行制备编号为130616-1的供试样品溶液6份，分别进样，每次进样10 μL，记录各共有峰的保留时间和峰面积。以4号峰的保留时间和峰面积为参照，计算各共有