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黄芪多糖改善老年大鼠学习记忆水平及其机制研究 　　[摘要] 该研究通过观察黄芪多糖对老年大鼠学习记忆的影响，试探究其改善学习记忆能力的机制。实验以自然衰老雌性SD大鼠为动物模型，随机分为老年对照组、老年黄芪多糖低、高剂量组（50，150 mg?kg-1）和老年脑复康组（阳性对照，560 mg?kg-1），各组大鼠连续灌胃给药60 d，另设青年对照组。采用旷场和Morris水迷宫测试大鼠的学习记忆能力，蛋白免疫印迹法观察海马组织相关神经可塑性蛋白N-甲基-D-天门冬氨酸受体（NMDA受体）、钙/钙调蛋白依赖的蛋白激酶Ⅱ（CaMKⅡ）、蛋白激酶A（PKA）、cAMP反应元件结合蛋白（CREB）的磷酸化水平及脑源性神经营养调控因子（BDNF）的蛋白表达水平。研究发现与青年对照组比较，老年大鼠学习和记忆能力均显著下降（P　　[关键词] 老年大鼠；黄芪多糖；神经可塑性 　　[收稿日期] 2013-11-14 　　[基金项目] 中国科学院知识创新方向性项目（KSCX2-YW-R-254）；浙江省中西医结合老年医学重点学科项目 　　[通信作者] 郭建友，博士，研究员，Tel /Fax：（010E-mail：guojy@ 　　[作者简介] 姚惠，副主任中医师，TelE-mail：630434587@ 　　目前我国60岁以上老年人口已经超过总人口的10%，人口年龄结构开始进入老龄化阶段。伴随着年龄增长常出现脑机能退化和神经退行性病变，引起常见的认知功能障碍包括学习能力下降及迟发记忆障碍。现有的治疗老年性痴呆药物如胆碱酯酶抑制剂能够短期治疗记忆功能缺失，但是并不能阻止神经退行性变[1]。因此，寻找能够阻止或延缓年龄增长导致的记忆减退，促进健康老龄化进程的药物显得非常重要[2]。黄芪是一味药用历史悠久、临床应用广泛的传统补益类中药。黄芪及其提取物的抗衰老药理作用已经为临床实践所证实，其中黄芪多糖（Astragali Radix polycose，APS）是从黄芪中分离提纯的主要有效成分，具有提高免疫、抗氧化等作用。已有研究表明黄芪多糖能够降低老年小鼠的自由基水平，对衰老成纤维细胞具有保护作用[3]。但黄芪多糖是否能够阻止或者延缓年龄增长导致的记忆减退等症状，目前并没有相关的文献报道。 　　由于缺乏较公认的衰老及老年痴呆动物模型，抗衰老药物的发展缓慢。其中自然衰老动物是最接近人类衰老变化的动物模型[4-5]。另一方面，女性比男性更容易出现认知功能障碍，年龄超过65岁的女性更早出现神经退行性病变且发病进程更快，女性的发病率也是男性的2～3倍[6-7]。因此在本研究中，选用雌性老年大鼠作为衰老动物模型，考察黄芪多糖对老年大鼠的学习记忆能力的影响。由于神经元的突触可塑性与学习和记忆密切相关，通过测定大鼠海马中神经可塑性相关蛋白表达水平探讨黄芪多糖抗衰老的作用机制。 　　1 材料与方法 　　1.1 动物 雌性老年Sprague-Dawley（SD）大鼠48只，清洁级，20～22月龄，体重360～420 g；雌性SD青年大鼠12只，4月龄，体重200～220 g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供。适应性饲养7 d后进行实验，动物自由摄水，室温控制23～25 ℃，湿度为50%～70%，光照12 h，黑暗12 h。 　　1.2 药品 黄芪多糖购自西安鸿生生物技术有限公司，纯度95%，以生理盐水配成0.1 g?mL-1；阳性对照药物为脑复康（piracetam），购自北京市曙光制药厂，以生理盐水溶解配成0.056 g?mL-1。 　　1.3 试剂及仪器 总蛋白提取试剂盒（普利莱基因技术有限公司）；p-NMDAR和t-NMDAR1抗体（美国Cell Signaling Technology公司）；p-CaMKⅡ，t-CaMKⅡ，p-PKACβ，t-PKACβ，p-CREB，t-CREB，BDNF，β-actin抗体（美国Sant Cruz公司）；ECL发光底物显色试剂盒（美国Pierce公司）；IgG-HRP二抗（北京中杉公司）；其他化学试剂均为国产分析纯。旷场测试系统（美国Med Associates公司）；Morris水迷宫系统（中国医学科学院药物研究所）；高速冷冻离心机（Beckman Allegra 64R）；UV-2800紫外分光光度计（龙尼柯上海仪器有限公司）；垂直板电泳转移装置（美国Bio-Rad公司）。 　　2 方法 　　2.1 动物分组及给药 48只SD老年大鼠随机分为4组，每组12只。老年大鼠（模型）组，不给药，灌胃生理盐水；阳性药物对照组灌胃脑复康， 剂量为560 mg?kg-1?d-1；黄芪多糖高、低剂量组灌胃黄芪多糖，剂量分别为150，50 mg?kg-1?d-1。同时将青年SD大鼠12只