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大肠杆菌素对抗尿路感染研究现状与展望 　　摘要：临床上多重耐药菌株普遍出现的重要原因之一是广谱抗生素的普遍使用；大肠杆菌是泌尿外科临床中最常见也是最难治疗的多重耐药菌株之一，如何预防及治疗大肠杆菌的感染、有效避免多重耐药菌株的出现是迫在眉睫的临床问题。大肠杆菌素由大肠杆菌产生，其抗菌谱窄，不易产生耐药性，被视为有效的预防策略之一，很有可能成为新一代的抗菌药物。本文综述了重要的大肠杆菌素作为一种替代手段来预防、治疗尿路各种大肠杆菌相关的感染，分析其抗尿路感染的前景及临床应用所面临的问题。 　　关键词：大肠杆菌；细菌素；大肠杆菌素；尿路感染；耐药性 　　细菌素是由细菌产生的一种蛋白类抗菌物质，为一类抗菌肽，通常只作用于与产生菌同种的其他菌株或亲缘关系很近的菌株[1，2]。细菌通常会产生毒素来杀灭竞争细菌。大肠杆菌素就是由大肠杆菌产生并对近缘大肠杆菌产生毒性的一种细菌素，通过结构蛋白杀死细菌[3]。现就大肠杆菌素作用机理、临床应用价值与前景、面临的问题等进行文献综述。 　　1大肠杆菌素的生物学特点 　　大肠杆菌素是由大肠杆菌所分泌的毒性蛋白质，对大肠杆菌及其相近菌种造成毒杀的效果[4]。到目前为止已经描述的大肠杆菌素超过34种，报道较多的是：A、B、D、E1-E9、Ia、Ib、JS、K、M、N、U、5、10 等。一般情况下，他们相互作用到敏感细菌包括三个步骤[5]：①大肠杆菌素分子结合到细菌外膜的特定受体上；②通过细胞膜易位；③特定分子对靶细胞的致死作用。大肠杆菌素蛋白质具有3种结构域：运输结构域（主要负责把这种蛋白质转运进靶细胞）、受体结合结构域（主要负责与目标细胞特异受体相结合）、杀伤结构域（主要通过小孔形成和核酸酶产生作用）。当能产生细菌素的细胞开始合成杀伤结构域时，杀伤结构域首先和一种免疫蛋白相结合，这种免疫蛋白在移除之前起作安全帽的作用。杀伤的特异性是由受体结合结构域来决定[6]。不同的大肠杆菌素其作用方式和抗菌效果也不尽相同，而不同的大肠杆菌素组合的抗菌效果也不相同。 　　2重要大肠杆菌素的抗尿路感染作用 　　由于细菌素是由细菌产生的高度特异的天然抗生素，只对产生细菌素菌株的近缘细菌有毒性作用[7]。人们开始着手研究大肠杆菌细菌素的抗大肠杆菌感染的作用及机理。重要的有以下几种。 　　2.1大肠杆菌素E2预防导尿管所致尿路感染的作用 需要留置导尿管的患者会出现泌尿道病原体慢性感染和尿路感染的复发[8]，而长期留置导尿管会使尿道病原体形成生物膜，这种病原体在尿液中持续种植，细菌定植在生物膜上，对标准抗菌剂有很强的抵抗作用[9]。因此，在长期留置导尿管的患者，抗生素不能有效的防止泌尿道感染，更加不利的是频繁运用抗生素会导致病原体耐药性的出现，以及二重感染[10]。这促使人们寻找新的预防及治疗方法。 　　有研究在琼脂板上种植K-12，col+，37℃条件下培养过夜，然后暴露在氯仿中杀死该菌，在琼脂平板上覆盖108cfu/ml测试菌株（colS或者colR），培养过夜。结果表明：均匀的涂有ColS的琼脂平板上可见清晰的抑菌带（直径10mm）出现在K-12，col+接种周围。ColS的抑菌带没有出现在K-12，col-周围，均匀涂有ColR的琼脂平板上亦没有出现抑菌带，证明ColS被质粒阳性K-12所产生的大肠杆菌素E2杀死或者抑制。这说明：大肠杆菌K-12涂在导尿管上其产生的大肠杆菌素E2能完全预防对大肠杆菌素敏感的大肠杆菌在其上面的增殖[11]。 　　2.2大肠杆菌素K对抗尿路病原性大肠杆菌的作用 大肠杆菌素K对致肾盂肾炎大肠杆菌（UPEC）具有明显的抑制活性[12]。大肠杆菌素K是编码细菌形成小的孔隙，造成细菌死亡，有大肠杆菌素ColE1类似质粒的细菌素。菌群中有三个基因编码大肠杆菌素的产生和释放：cka为编码大肠杆菌素的活性，Cki为编码免疫力，ckl为编码细胞溶解[13]。 　　目前已有实验就大肠杆菌素K的抑菌量及效果进行了研究。大肠杆菌素K在大肠杆菌菌株BL21中表达（DE3）[14]。按照标准实验室的要求分离菌株，UPEC菌株的分离是从尿路感染尿液细菌培养105CFU/ml。进行5μm的各种浓度（0.1，1，10，和100μg/ml）的大肠杆菌素K在LB平板上进行对UPEC菌株的抑菌实验，在37°C培养过夜后，平板用于检查大肠杆菌素对覆盖菌株的敏感性。 　　结果表明，共有68%的测试UPEC菌株敏感和32%对大肠杆菌素K耐药。然而，在敏感菌株中，对各种不同敏感性进行观察。结果，18%的菌株由0.1μg/ml抑制，3%的由1μg/ml抑制，16%由10μg/ml抑制，31%由100μg/ml的大肠杆菌素K抑制[12]。基于这些敏感性的不同可能是由于在每个细胞上不同数量的受体[15]。对供试的UPEC菌株，大肠杆菌素K表