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基于均匀设计优化深山草莓花瓣离体培养及植株再生体系 　　摘 要:应用均匀设计法对深山草莓花瓣诱导愈伤组织和愈伤组织再分化芽苗的主要因子和水平进行了探讨.结果表明,深山草莓花瓣愈伤组织诱导的适宜培养基为LS+TDZ 2.06 mg#8226;L-1 +2,4-D 0.60 mg#8226;L-1,诱导率为98%;愈伤组织再分化芽苗的适宜培养基为1/2 LS+TDZ 2.30 mg#8226;L-1+NAA 0.10 mg#8226;L-1+KT 1.30 mg#8226;L-1,分化率为96.3%.炼苗移栽后观察植株的形态、花、果及生长等特征,以筛选具有优良性状的株系. 中国论文网 /4/viewhtm　　关 键 词:深山草莓; 均匀设计; 花瓣; 离体培养; 植株再生 　　中图分类号:S?@668.4 文献标志码:A 文章编号:1008-9497(2010)06-700-05 　　 　　深山草莓Fragaria orientalis Lozinsk var. concolor(Kitag.) Liou et C. Y. Li别名绿叶东方草莓.是蔷薇科草莓属多年生草本植物,为长白山野生种草莓.其聚合果肉质、膨大较小、味酸甜、有香气、果形为球形或卵形、产量极低,成熟后紫红色.仅呈小群落分布于长白山海拔800~1 200 m的草地和林下,是草莓育种的优良野生种质资源.目前,国内外关于草莓组培快繁和育种的研究较多[1-3],但利用野生草莓花瓣诱导愈伤组织和愈伤组织再分化芽苗的研究尚未见报道.笔者在前人报道和近10余年试验基础上,开展了深山草莓花瓣诱导愈伤组织和愈伤组织再分化芽苗的筛选试验,以期获得深山草莓花瓣再生植株的最佳培养条件,并在再生植株中筛选具有优良性状的株系.同时,本试验采用均匀设计法对影响深山草莓花瓣愈伤组织及愈伤组织再分化芽苗的激素浓度配比进行优化组合筛选,避免了全面试验的繁琐和试验周期较长等缺点.本试验研究结果为利用植物组织培养进行草莓育种奠定基础. 　　 　　1 材料与方法 　　 　　1.1 试 材 　　深山草莓花瓣. 　　1.2 方 法 　　1.2.1 材料处理 　　将深山草莓未开放花蕾(带1.5 cm花柄)剪下,在超净工作台上用70%酒精处理30 s,再用次氯酸钠(质量比为0.5%)溶液浸泡10 min,无菌水冲洗8次,无菌滤纸吸干表面的水分[4],切除受损花柄留1 cm.将花蕾(花柄朝下)插入LS培养基中,待花蕾开放后以便取花瓣进行诱导愈伤组织. 　　1.2.2 深山草莓花瓣愈伤组织诱导培养基的筛选 　　以LS为基本培养基[5],内含蔗糖20 g#8226;L-1,琼脂粉7.5 g#8226;L-1,再附加不同质量浓度的细胞分裂素TDZ(由预试验确定为1.40～2.40 mg#8226;L-1,TDZ低于1.40 mg#8226;L-1时形成的愈伤组织质地疏松,这样的愈伤组织很难分化,高于2.40 mg#8226;L-1时愈伤组织诱导速度极慢且诱导率低,仅达32??0%)和生长素2,4-D(由预试验确定为0.10～0??60 mg#8226;L-1,低于0.10 mg#8226;L-1时诱导率极低,仅为40.0%,高于0.60 mg#8226;L-1时愈伤组织形成速度快,但很快变黑死亡),调节pH=5.6,外植体在温度(23±2) ℃、光照强度25 μmol#8226;m-2#8226;s-1、光照周期10 h#8226;d-1条件下培养,为了提高深山草莓花瓣愈伤组织的诱导速度和诱导率,采用均匀设计法[6-8],每个处理接种花瓣数为10,重复3次,选用U11(11??2)均匀表(见表1),考察TDZ和2,4-D不同质量浓度交叉配比对诱导率的影响(见表2).每个处理的愈伤组织诱导率均为3次重复试验得到的诱导率平均值.花瓣培养45 d统计愈伤组织诱导率,筛选最适合诱导深山草莓花瓣产生愈伤组织的培养基. 　　1.2.3 深山草莓花瓣愈伤组织再分化芽苗培养基的筛选及生根培养和炼苗移栽 　　以1/2LS为培养基,加入蔗糖30 g#8226;L-1,琼脂7.5 g#8226;L-1,并附加不同浓度的TDZ(由预试验确定为2.30～3.20 mg#8226;L-1,低于2.30 mg#8226;L-1或高于3.20 mg#8226;L-1时愈伤组织分化率低,均在13.0%以下)、NAA(由预试验确定为0.10～0.30 mg#8226;L-1,低于0.10 mg#8226;L-1时分化出的芽苗长势弱,生长速度缓慢,高于0.30 mg#8226;L-1时愈伤组织增殖速度快,分化率下降,不足48.0%)和KT(由预试验确定为0.80～1.30 mg#8226;L-1,低于0.80 mg#8226;L-1或高