云南省西双版纳勐县学龄前儿童地贫调查及基因单倍型分析.docVIP

云南省西双版纳勐海县学龄前儿童地贫调查及基因单倍型分析 　　[摘要]目的：对西双版纳州勐海县学龄前儿童进行地中海贫血的流行病学调查和基因单倍型分析。方法：勐海县妇幼保健院体检的儿童应用血红蛋白电泳联合血常规筛查地贫，同时对所有病例进行α-地贫、β-地贫基因检测.应用连锁分析和限制性?惹忻钙?段长度多态性方法分析当地地贫人群的基因单倍型。结果：在103名受检的学龄前儿童中，确诊α-地贫者14例，β地贫9例，α-地贫复合β-地贫2例， α-地贫基因携带率15.5%，β-地贫基因携带率12.6%。检出5种与地贫相关的基因单倍型。结论：西双版纳州勐海县是地贫高发地区，研究结果有助于当地地贫防控有效开展. 中国论文网 /6/viewhtm　　[关键词]地中海贫血：云南省；基因单倍型 　　地中海贫血是我国南方各省影响最大、发病率最高的遗传病之一，多见于广东、广西、云南、海南等省。重型地贫患儿需要终生输血治疗，常因慢性溶血性贫血和铁离子负荷，导致肝脾肿大、心肌损害，最终治疗无效死亡。中间型地贫患者也会因持续的慢性溶血性贫血而出现生长发育迟缓、体能低于正常人。轻型地中海贫血可无临床症状，极易被漏诊、误诊。世居于云南省内，人口超过百万的少数民族如傣族、壮族已经被报道是地贫高发的民族。不同民族地贫类型构成比以及发病情况有较大区别，对地贫高发地区进行流行病学研究有助于地贫防控的有效开展，但目前为止尚无明确系统的研究了解云南省儿童地贫状况特别是少数民族中血红蛋白病的流行状况。本文报道西双版纳勐海县妇幼保健院2013年2月至2013年7月期间，对103例儿童进行地贫筛查及地贫家系研究的临床研究结果。 　　1资料和方法 　　1.1资料来源 　　研究对象为2013年2月-2013年7月在云南省西双版纳州勐海县妇幼保健院进行体检的6月-6岁儿童103人，同时对患者进行血常规、血红蛋白电泳筛查以及地贫基因诊断，同时登记登记受检者的姓名、编号、民族、籍贯、年龄等信息，血红蛋白电泳、血常规资料和基因诊断结果输入Excel软件数据库中保存。 　　1.2方法 　　1.2.1血红蛋白电泳筛查 　　受检者进行检查时抽取受检儿童静脉血2ml，EDTA抗凝，4-8℃冷藏保存1-5天内检测。采用血红蛋白电泳法定量检测各血红蛋白成份的比例，分析异常血红蛋白区带。 　　1.2.2血常规检测 　　用贝克曼LH750型全自动血液分析仪进行检测，主要观察的参数：平均红细胞血红蛋白量（MCH）、平均红细胞体积（MCV）、红细胞血红蛋白量（Hb）、红细胞体积分布宽度（RDW）以及平均红细胞血红蛋白浓度（MCHC）。α-地贫分子筛查的血液学指标是：MCV3.5%；②表现出HbE电泳带或者其它异常条带；③HbF5.0%。 　　1.2.3地贫基因诊断 　　α-或β-珠蛋白基因常见突变检测：使用深圳亚能生物技术有限公司生产的地贫基因诊断试剂盒，采用PCR-反向斑点杂交法（PCR-reversed dot blotting，PCR-RDB），检测中国人群。β-珠蛋白基因常见17个位点的18种突变；采用多重PCR法检测。一珠蛋白基因常见的3种缺失：-SEA（东南亚缺失型）、-α3.7（右缺失型）、-α4.2（左缺失型）。 　　1.2.4珠蛋白基因单倍型分析 　　对9例本次确诊。一地贫和以往收集的7例确诊β-地贫的家系，进行β-珠蛋白基因单倍型的研究。采用基于PCR的RFLP技术和家系连锁分析方法确定先证者两条β-地贫染色体的单倍型，选择的7个RFLP位点分别是：Hind Ⅱ-5′ε，HindⅢ-Cγ，Hind Ⅲ Aγ，Hind Ⅱ-ψβ，HincⅡ-3′ψβ，AvaⅢ-β，BamHI-3′β。引物、实验条件以及单倍型命名原则参见文献。 　　2结果 　　2.1地贫基因诊断结果 　　对103例儿童进行血常规联合血红蛋白电泳筛查；根据筛查结果，α-地贫筛查阳性病例进行3种缺失型。α-地贫的检测，β-地贫筛查阳性病例进行18种常见β-地贫的检测以及3种缺失型。α-地贫的检测。共检出14例。α-地贫，9例β-地贫（2例为重症β-地贫患儿），2例α-地贫合并β-地贫（-α3.7合并CD17型1例，-α4.2合并CD26型1例）。α-地贫的基因携带率是15.53%（16/103），β-地贫的基因携带率是12.62%（13/103）。 　　2.2基因单倍型分析结果 　　使用连锁分析和RFLP技术分析共16例确诊β-地贫的家系的基因单倍型，其中有7个家系未能提供连锁信息，不能检测出基因单倍型类型。9例确诊。β-地贫的家系中，发现CD41-42突变类型有三种相关的基因单倍型类型（Ⅶ、Ⅴ、Ⅰ），CD17突变类型的基因单倍型为Ⅶ，CD26突变类型的基因单倍型为Ⅲ、CD27/28突变类型的基因单倍型为Ⅳ。