丹参酮ⅡA对H9c2心肌细胞缺血再灌注损伤保护机制.docVIP

丹参酮ⅡA对H9c2心肌细胞缺血再灌注损伤保护机制 　　[摘要] 目的 观察丹参酮IIA对心肌缺血再灌注损伤的保护作用及相关信号传导通路。 方法 通过建立H9c2心肌细胞缺血再灌注模型，分别加入不同浓度丹参酮IIA，采用CCK-8检测细胞存活率，通过流式细胞术检测细胞凋亡率；另外分为丹参酮IIA组、AG490组、丹参酮IIA及AG490组，通过Western blot方法检测JAK2、P-JAK2、STAT3、P-STAT3蛋白表达。 结果 CCK-8检测显示模型组细胞存活率为78.90%±5.163%，与对照组比较，差异有统计学意义（P0.05；丹参酮IIA 10 μM组细胞存活率为90.62%±2.321%，与模型组比较，P　　[关键词] 丹参酮IIA； H9c2心肌细胞； 缺血再灌注； JAK2/STAT3信号通路 　　[中图分类号] R965 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2014）33-0001-03 　　[Abstract] Objective To study the protective effect of tanshinone IIA on myocardial ischemia-reperfution（I/R） injury and related signialing pathway. Methods Made H9c2 myocytes I/R models， add different concentrations of tanshinone IIA after 24 hours， then test apoptosis rate by cck-8 and flow cytometry. Add tanshinone IIA， AG490， tanshinone IIA+AG490 respectively， then assay the expression of JAK2， P-JAK2， STAT3， P-STAT3 by western blot. Results CCK-8 tests showed the cell survival rate of model group was 78.90%±5.163%， compared with the control group had statistical differences. Compared with the model group， the cell survival rate increased to 85.76%±6.101% at the tanshinone IIA concentration of 2.5 μM（P0.05）， increased to 90.62%±2.321% at the tanshinone IIA concentration of 10 μM （P 　　1材料与方法 　　1.1 细胞株与主要试剂 　　H9c2大鼠心肌细胞株来自美国ATCC，在含10%胎牛血清的高糖DMEM完全培养基内，5%CO2、37℃培养。JAK2激酶抑制剂（AG490，Calbiochem公司，美国）；丹参酮IIA（雅安三九药业有限公司提供，批号981011）。 　　1.2 心肌缺血再灌注模型建立及分组 　　按文献[3]方法对H9c2细胞进行缺血再灌注处理。配制正常台氏液：140 mmol/L NaCl，6 mmol/L KCl，1 mmol/L MgCl2，1 mmol/L CaCl2，5 mmol/L HEPES，5.8 mmol/L葡萄糖，pH 7.4。配制缺血台氏液：140 mmol/L NaCl，6 mmol/L KCl，1mmol/L MgCl2，1 mmol/L CaCl2，5 mmol/L HEPES，10 mmol/L D-2-脱氧葡萄糖，10 mmol/L Na2S2O4，pH 7.4。对数生长期细胞，去除培养基，PBS洗涤后，加入正常台氏液预培养1 h后制备缺血再灌注模型，加入缺血台氏液培养24 h。实验分为对照组、缺血再灌注组、丹参酮IIA组、AG490组及丹参酮IIA+AG490组。 　　1.3实验方法及观察指标 　　①细胞损伤的测定：采用CCK-8法测定细胞存活率，H9c2细胞加入缺血台氏液培养24 h后分别加入丹参酮IIA 2.5 μM，10 μM，40 μM，按照密度为2×104/孔接种至96孔板，于37℃孵育3 h后，通过酶标仪于450 nm波长下行吸光度值测定。对照组细胞存活率设定为100%，细胞存活率=实验组/对照组×100%。H9c2细胞加入缺血台氏液培养24 h后实验组分别加入丹参酮IIA 2.5 μM，10 μM，40 μM，通过流式细胞术检测细胞凋亡率。